Quais são os componentes estruturais especiais de um microscópio fluorescente?
O bloco de filtro colorido é uma parte importante de um microscópio de fluorescência e seus componentes principais consistem em um primeiro filtro de barreira para luz de excitação, um segundo filtro de barreira para luz de emissão e um espelho de divisão de feixe. Os modelos de filtros de cores e os nomes de vários fabricantes costumam ser inconsistentes.
1. Filtro de luz de excitação e filtro de luz de emissão: Com base nas características da fonte de luz e do pigmento fluorescente, os três tipos de correspondência a seguir são geralmente selecionados para fornecer luz de excitação dentro de uma determinada faixa de comprimento de onda e permitir que a fluorescência excitada pela amostra passe e alcance a ocular para geração de imagens.
Excitação UV: O filtro de luz de excitação pode permitir a passagem da luz UV e bloquear a passagem da luz visível acima de 400 nm. O filtro de luz de emissão correspondente permite a passagem da luz azul e a luz no campo de visão parece azul, como quando aplicada à coloração DAPI.
Excitação de luz azul: O filtro de luz de excitação pode permitir a passagem da luz azul e bloquear a luz de outros comprimentos de onda. O filtro de luz de emissão correspondente permite a passagem da luz verde, como marcadores de coloração GFP.
Excitação de luz verde: O filtro de luz de excitação permite a passagem da luz verde e bloqueia a luz de outros comprimentos de onda. O filtro de emissão de luz correspondente geralmente permite a passagem da luz vermelha, como a coloração com rodamina.
2. Filtro de cor semi transparente e semi reflexivo: Sua função é bloquear completamente a passagem da luz de excitação e refleti-la; E emita luz dentro da faixa de comprimento de onda correspondente. Seu modelo corresponde ao filtro de luz de excitação e ao filtro de luz de emissão.
(2) Lente objetiva e ocular
Várias lentes objetivas podem ser aplicadas, mas é melhor escolher lentes com escala adicional e redução de aberração cromática, pois sua autofluorescência é extremamente baixa e seu desempenho de transmissão de luz (faixa de comprimento de onda) é adequado para fluorescência. Devido ao fato de que o brilho de fluorescência de uma imagem no campo do microscópio é diretamente proporcional ao quadrado da razão de abertura da lente objetiva e inversamente proporcional à sua ampliação, para melhorar o brilho das imagens de fluorescência, uma lente objetiva com uma relação de abertura maior deve ser utilizada. Especialmente para amostras com fluorescência insuficiente, deve-se utilizar uma lente objetiva com alta taxa de abertura e alta transmitância de luz, acompanhada de uma ocular com a menor ampliação possível.
(3) Outros dispositivos ópticos
A camada reflexiva de um espelho é geralmente revestida com alumínio porque o alumínio absorve menos luz ultravioleta e visível na região azul roxa, refletindo mais de 90% (enquanto a prata tem uma refletividade de apenas 70%). Geralmente, são usados espelhos planos. A lente de foco, projetada e fabricada especificamente para microscópios de fluorescência, é feita de vidro de quartzo ou outro vidro que transmite luz ultravioleta. O dispositivo de luz incidente, além de ter a função de fonte de luz transmissiva, é mais adequado para observação direta de amostras opacas e semitransparentes, como placas espessas, membranas filtrantes, colônias bacterianas, culturas de tecidos e outras amostras. Nos últimos anos, muitos novos tipos de microscópios de fluorescência foram desenvolvidos usando um dispositivo de luz descendente, conhecido como microscópio de fluorescência de luz descendente.
(4) Fonte de luz
Hoje em dia, lâmpadas de mercúrio de alta-pressão de 50 ou 100 W são comumente usadas como fontes de luz. Durante a operação, a descarga ocorre entre dois eletrodos, fazendo com que o mercúrio evapore e a pressão dentro da esfera aumente rapidamente (esse processo geralmente leva cerca de 5 a 15 minutos). Durante este processo, são emitidos quanta de luz e o comprimento de onda da luz libertada é suficiente para excitar várias substâncias fluorescentes. Portanto, é amplamente utilizado em microscópios de fluorescência.
A vida útil das lâmpadas de mercúrio é relativamente curta, geralmente 200 horas. Em resposta a esta limitação na vida útil, nos últimos anos, um novo tipo de fonte de luz fluorescente X-Cite tem sido amplamente utilizado com uma vida útil super longa de 2.000 horas e uso flexível - sem necessidade de pré-aquecimento, pronto para uso.
