Os microscópios de fluorescência são classificados em dois tipos com base em seus caminhos ópticos:
1. Microscópio de fluorescência de transmissão: A fonte de luz de excitação é usada para excitar a fluorescência passando através do material da amostra através de uma lente condensadora. Concentradores de campo escuro comumente usados também podem ser usados, e concentradores comuns podem ser usados para ajustar o refletor para redirecionar e lóbulo lateral a luz de excitação para a amostra. Este é um microscópio de fluorescência relativamente{3}antigo. Sua vantagem é a forte fluorescência em baixa ampliação, mas sua desvantagem é que sua fluorescência diminui com o aumento da ampliação. Portanto, é melhor observar materiais de amostras maiores.
2. O microscópio de fluorescência com luz descendente é um novo tipo de microscópio de fluorescência desenvolvido nos tempos modernos. Ao contrário do acima, a luz de excitação cai da lente objetiva para baixo na superfície da amostra, usando a mesma lente objetiva que o condensador de iluminação e a lente objetiva para coletar a fluorescência. Um divisor de feixe de duas cores precisa ser adicionado ao caminho óptico, que está a 45 graus de distância do urânio leve. Ângulo, a luz de excitação é refletida na lente objetiva e focada na amostra. A fluorescência gerada pela amostra, bem como a luz de excitação refletida na superfície da lente objetiva e da lamela, entram na lente objetiva e retornam ao divisor de feixe de duas cores, separando a luz de excitação e a fluorescência. A luz de excitação residual é então absorvida pelo filtro de bloqueio. Se diferentes combinações de filtros de excitação/separadores de feixe de cor dupla/filtros de bloqueio forem usadas, elas poderão atender às necessidades de diferentes produtos de reação fluorescente. As vantagens deste microscópio de fluorescência são iluminação de campo uniforme, imagem nítida e fluorescência mais forte com ampliação maior.
(2) Instruções para usar microscópio de fluorescência
1. Ligue a fonte de luz. A lâmpada de mercúrio de ultra{2}}alta pressão precisa ser pré-aquecida por alguns minutos para atingir seu brilho máximo.
2. A microscopia de fluorescência de transmissão requer a instalação do filtro de excitação necessário entre a fonte da lâmpada e o condensador, e o filtro de bloqueio correspondente atrás da lente objetiva. O microscópio de fluorescência de luz descendente precisa inserir o filtro de excitação/divisor de feixe de cor dupla/bloco de filtro de bloqueio necessário na ranhura do caminho óptico.
3. Observe com um microscópio-de baixa potência e ajuste o centro da fonte de luz de acordo com o dispositivo de ajuste dos diferentes tipos de microscópios de fluorescência, de modo que fique localizado no centro de todo o ponto de iluminação.
4. Coloque a amostra e foque-a para observação. Deve-se prestar atenção durante o uso: Não observe diretamente com os olhos antes de instalar o filtro para evitar danos aos olhos; Ao observar amostras com um microscópio a óleo, deve ser usado um microscópio especial a óleo não fluorescente; Depois que a lâmpada de mercúrio de alta{2}}pressão for desligada, ela não poderá ser ligada novamente imediatamente. Demora 5 minutos para reiniciar, caso contrário ficará instável e afetará a vida útil da lâmpada de mercúrio.
(3) Observando sob um microscópio de fluorescência em uma plataforma de ensino usando um filtro de luz azul violeta, podem ser vistas células coradas com corante fluorescente laranja acridina 0,01%. O núcleo e o citoplasma são excitados para produzir duas cores diferentes de fluorescência (verde escuro e vermelho alaranjado).
