Microscópio de biofluorescência na vertical
O princípio da microscopia de fluorescência é usar uma fonte de luz pontual altamente eficiente (como uma lâmpada de mercúrio de pressão ultra-alta) para emitir um certo comprimento de onda da luz (como luz ultravioleta 3650 λ ou luz azul roxa 4200 λ) através de um sistema de filtro de cores como uma luz de excitação, que excita a fluorescentes. Em seguida, é filtrado por um filtro de bloqueio (ou suprimido) atrás da lente objetivo e observado através do efeito de ampliação da ocular.
O filtro de bloqueio tem duas funções: primeiro, ele absorve e bloqueia a luz de excitação de entrar na ocular para evitar interferir na fluorescência e danificar os olhos; O segundo é selecionar e permitir passar a fluorescência específica, exibindo uma cor fluorescente específica.
Os microscópios de fluorescência podem ser divididos em dois tipos com base no princípio do caminho da luz:
1. Microscópio de fluorescência de transmissão
Os microscópios de fluorescência mais antigos usam um holofote para excitar a fluorescência passando a fonte de luz de excitação através do material da amostra. Sua vantagem é a forte fluorescência com baixa ampliação, mas sua desvantagem é que sua fluorescência diminui com a crescente ampliação. Portanto, é adequado apenas para observar materiais maiores de amostra.
2. Microscópio de fluorescência leve em queda
A luz de excitação cai da lente objetiva na superfície da amostra, usando a mesma lente objetiva que o condensador de iluminação e a lente objetiva para coletar fluorescência.
Um divisor de feixe de cores duplo (espelho dicroico) precisa ser adicionado ao caminho óptico, que forma um ângulo de 45 graus com o eixo óptico. A luz de excitação é refletida na lente objetiva e focada na amostra. A fluorescência gerada pela amostra, bem como a luz de excitação refletida na superfície da lente objetiva e tampa o vidro, entra na lente objetiva ao mesmo tempo e retorne ao divisor de feixe de cores duplo para separar a luz de excitação e a fluorescência. A luz de excitação residual é então bloqueada pela absorção do filtro. Se diferentes combinações de filtros de excitação, separadores de feixe de cores duplos e filtros de bloqueio forem usados, eles podem atender às necessidades de diferentes produtos de reação fluorescente.
As vantagens deste microscópio de fluorescência são iluminação de campo uniforme, imagem clara e fluorescência mais forte com maior ampliação.
