Dois métodos de observação microscópica comumente usados
1, Observação de campo escuro
O campo de visão escuro é na verdade uma iluminação de campo escuro. Suas características são diferentes do campo de visão claro, pois não observa diretamente a luz iluminante, mas sim a luz refletida ou difratada do objeto que está sendo inspecionado. Portanto, o campo de visão torna-se um fundo escuro, enquanto o objeto que está sendo inspecionado apresenta uma imagem brilhante
O princípio do campo escuro é baseado no fenômeno óptico de Tyndall, onde as partículas de poeira não podem ser observadas pelo olho humano quando expostas à luz forte devido à difração causada pela luz forte. Se a luz for projetada obliquamente sobre ela, as partículas parecem aumentar de volume devido ao reflexo da luz, tornando-as visíveis ao olho humano
O acessório especial necessário para a observação de campo escuro é um holofote de campo escuro. Sua característica é que ele não permite que o feixe de luz passe através do objeto de baixo para cima, mas muda o caminho da luz para ser direcionado obliquamente em direção ao objeto, de modo que a luz de iluminação não entre diretamente na lente objetiva e use a imagem brilhante formada pela reflexão ou difração da luz na superfície do objeto que está sendo inspecionado A resolução da observação de campo escuro é muito maior do que a da observação de campo claro, chegando até 0,02-0,004
2, Método de inspeção de espelho de contraste de fase
A invenção bem-sucedida da microscopia de contraste de fase no desenvolvimento de microscópios ópticos é uma conquista importante na moderna tecnologia de microscopia. Sabemos que o olho humano só consegue distinguir o comprimento de onda (cor) e a amplitude (brilho) das ondas de luz. Para amostras biológicas incolores e transparentes, quando a luz passa, o comprimento de onda e a amplitude não mudam muito, dificultando a observação da amostra em um campo claro
O microscópio de contraste de fase utiliza a diferença no comprimento do caminho óptico do objeto que está sendo inspecionado para inspeção por espelho, utilizando efetivamente o fenômeno de interferência da luz para transformar a diferença de fase que não pode ser distinguida pelo olho humano em uma diferença de amplitude distinguível. Mesmo substâncias incolores e transparentes podem se tornar claramente visíveis. Isso facilita muito a observação de células vivas, portanto a microscopia de contraste de fase é amplamente utilizada em microscópios invertidos
O princípio básico da microscopia de contraste de fase é converter a diferença do caminho óptico da luz visível que passa pela amostra em diferença de amplitude, melhorando assim o contraste entre várias estruturas e tornando-as claras e visíveis. Depois de passar pela amostra, a luz sofre refração, desviando-se do caminho óptico original e sendo atrasada em 1/4 λ (comprimento de onda). Se a diferença do caminho óptico for aumentada ou diminuída em mais 1/4 λ, a diferença do caminho óptico torna-se 1/2 λ, e a interferência entre os dois feixes de luz aumenta ou diminui após a combinação do eixo, melhorando o contraste Em termos de estrutura, os microscópios de contraste de fase têm dois
diferenças especiais em relação aos microscópios ópticos comuns:
1. Um diafragma anular está localizado entre a fonte de luz e o condensador, e sua função é formar um cone oco de luz que passa pelo condensador e incide na amostra.
2. Placa de fase angular: Uma placa de fase revestida com fluoreto de magnésio é adicionada à lente objetiva, o que pode atrasar a fase da luz direta ou difratada em 1/4 λ. Pode ser dividido em dois tipos:
(1) . Placa de fase A+: Atrase a luz direta em 1/4 λ e adicione os dois conjuntos de ondas de luz após combinar os eixos. A amplitude aumenta e a estrutura da amostra torna-se mais brilhante que o meio circundante, formando um contraste brilhante (ou contraste negativo)
(2) . Placa de fase B+: Atrase a luz difratada em 1/4 λ e subtraia as ondas de luz após combinar os eixos de dois conjuntos de raios de luz, resultando em uma diminuição na amplitude e formando um contraste escuro (ou contraste positivo). A estrutura torna-se mais escura que o meio circundante
