As estruturas especiais dos microscópios de fluorescência incluem:
(1) Sistema de filtro de cores
O bloco de filtro colorido é uma parte importante de um microscópio de fluorescência e seus componentes principais consistem em um primeiro filtro de barreira para luz de excitação, um segundo filtro de barreira para luz de emissão e um espelho de divisão de feixe. Os modelos de filtros de cores e os nomes de vários fabricantes costumam ser inconsistentes.
1. Filtro de luz de excitação e filtro de luz de emissão: Com base nas características da fonte de luz e do pigmento fluorescente, os três tipos de correspondência a seguir são geralmente selecionados para fornecer luz de excitação dentro de uma determinada faixa de comprimento de onda e permitir que a fluorescência excitada pela amostra passe e alcance a ocular para geração de imagens.
Excitação UV: O filtro de luz de excitação pode permitir a passagem da luz UV e bloquear a passagem da luz visível acima de 400 nm. O filtro de luz de emissão correspondente permite a passagem da luz azul e a luz no campo de visão parece azul, como quando aplicada à coloração DAPI.
Excitação de luz azul: O filtro de luz de excitação pode permitir a passagem da luz azul e bloquear a luz de outros comprimentos de onda. O filtro de luz de emissão correspondente permite a passagem da luz verde, como marcadores de coloração GFP.
Excitação de luz verde: O filtro de luz de excitação permite a passagem da luz verde e bloqueia a luz de outros comprimentos de onda. O filtro de emissão de luz correspondente geralmente permite a passagem da luz vermelha, como a coloração com rodamina.
2. Filtro de cor semi transparente e semi reflexivo: Sua função é bloquear completamente a passagem da luz de excitação e refleti-la; E emita luz dentro da faixa de comprimento de onda correspondente. Seu modelo corresponde ao filtro de luz de excitação e ao filtro de luz de emissão.
(2) Lente objetiva e ocular
Várias lentes objetivas podem ser aplicadas, mas é melhor escolher lentes com escala adicional e redução de aberração cromática, pois sua autofluorescência é extremamente baixa e seu desempenho de transmissão de luz (faixa de comprimento de onda) é adequado para fluorescência. Devido ao fato de que o brilho de fluorescência de uma imagem no campo do microscópio é diretamente proporcional ao quadrado da razão de abertura da lente objetiva e inversamente proporcional à sua ampliação, para melhorar o brilho das imagens de fluorescência, uma lente objetiva com uma relação de abertura maior deve ser utilizada. Especialmente para amostras com fluorescência insuficiente, deve-se utilizar uma lente objetiva com alta taxa de abertura e alta transmitância de luz, acompanhada de uma ocular com a menor ampliação possível.
(3) Outros dispositivos ópticos
A camada reflexiva de um espelho é geralmente revestida com alumínio porque o alumínio absorve menos luz ultravioleta e visível na região azul roxa, refletindo mais de 90% (enquanto a prata tem uma refletividade de apenas 70%). Geralmente, são usados espelhos planos. A lente de foco, projetada e fabricada especificamente para microscópios de fluorescência, é feita de vidro de quartzo ou outro vidro que transmite luz ultravioleta. O dispositivo de luz incidente, além de ter a função de fonte de luz transmissiva, é mais adequado para observação direta de amostras opacas e semitransparentes, como folhas espessas, membranas filtrantes, colônias bacterianas, culturas de tecidos e outras amostras. Nos últimos anos, muitos novos tipos de microscópios de fluorescência foram desenvolvidos usando um dispositivo de luz descendente, conhecido como microscópio de fluorescência de luz descendente.
