A estrutura especial de um microscópio de fluorescência inclui:
(I) Sistema de filtro de cores
O filtro de cor é uma parte importante do microscópio de fluorescência, seus componentes principais são o filtro de luz de excitação (primeiro filtro de barreira), o filtro de emissão de luz (segundo filtro de barreira) e a composição meio transparente e meio anti-filtro (espelho divisor de feixe) . Vários fabricantes de modelos de filtros de cores, o nome muitas vezes não é uniforme.
1. Filtro de luz de excitação e filtro de luz de emissão: de acordo com a fonte de luz e as características do fluorocromo, geralmente escolha os três tipos de correspondência a seguir, para fornecer uma certa faixa de comprimento de onda da luz de excitação e fazer a excitação da amostra de fluorescência através a ocular para a imagem.
Excitação UV: O filtro de luz de excitação permite a transmissão da luz UV e bloqueia a passagem da luz visível acima de 400nm. O filtro de emissão correspondente permite a passagem de luz azul, que aparece azul no campo de visão, por exemplo, para coloração DAPI.
Excitação de luz azul: O filtro de luz de excitação permite a passagem da luz azul, bloqueando outros comprimentos de onda de luz. O filtro de emissão correspondente permite a passagem de luz verde, por exemplo, para marcadores de coloração GFP.
Excitação verde: O filtro de excitação permite a passagem da luz verde, bloqueando outros comprimentos de onda. O filtro de emissão correspondente geralmente permite a passagem da luz vermelha, por exemplo, coloração com rodamina.
2. Filtro meio transparente e meio reflexivo: sua função é bloquear completamente a excitação da luz através do reflexo; e através da faixa de comprimento de onda correspondente da luz emitida. Seu modelo corresponde à excitação dos filtros de luz e à emissão dos filtros de luz.
(B) lente objetiva e ocular
Uma variedade de lentes objetivas pode ser aplicada, mas * boa escolha de lentes objetivas simétricas e acromáticas, devido à sua autofluorescência ser muito pequena e às propriedades de transmissão de luz (faixa de comprimento de onda) adequadas para fluorescência. Como o brilho de fluorescência da imagem no campo de visão do microscópio é proporcional ao quadrado da taxa de abertura da objetiva e inversamente proporcional à sua ampliação, para melhorar o brilho da imagem de fluorescência, a objetiva com uma taxa de abertura grande deve ser usado. Especialmente para a fluorescência, as amostras não são fortes o suficiente, deve-se usar uma taxa de boca grande, objetiva de alta transmissão de luz, com a ocular o mais baixa possível.
(C) outros dispositivos ópticos
Refletor, sua camada reflexiva é geralmente revestida de alumínio, porque o alumínio na absorção de luz ultravioleta e visível da região azul-violeta é menor, refletindo até 90% ou mais (enquanto a refletividade da prata é de apenas 70%). Geralmente são usados refletores planos. Espelho refletor, projetado e fabricado especificamente para microscopia de fluorescência. Espelho refletor feito de vidro de quartzo ou outro vidro transparente aos raios UV. Dispositivo de luz descendente, que além da função de fonte de luz transmitida, é mais adequado para amostras opacas e translúcidas, como filme espesso, membrana filtrante, colônia, cultura de tecidos e outras amostras para observação direta. Nos últimos anos, o desenvolvimento de um novo tipo de microscópio de fluorescência usando dispositivo de luz descendente, denominado microscópio de fluorescência descendente.
(D) fonte de luz
Hoje em dia, lâmpadas de mercúrio de alta pressão de 50 ou 100W são usadas como fonte de luz. Trabalho pela descarga dos dois eletrodos, causada pela evaporação do mercúrio, a bola de pressão do ar aumenta rapidamente (esse processo geralmente leva cerca de 5 ~ 15min), e no processo de emissão de quanta de luz, o comprimento de onda da luz liberada é suficiente para excitar todos os tipos de substâncias fluorescentes, portanto, a microscopia de fluorescência é comumente usada.
As lâmpadas de mercúrio têm uma vida útil relativamente curta, geralmente 200 horas, e em resposta a esta limitação de vida útil, nos últimos anos, uma nova fonte de luz fluorescente, X-Cite, tem sido amplamente utilizada pela sua longa vida útil da lâmpada de 2.000 horas e pelo seu uso flexível. - não é necessário pré-aquecimento e está pronto para ser usado assim que sai da caixa.
