Os princípios e características estruturais dos microscópios de fluorescência
O microscópio de fluorescência usa uma fonte de luz pontual altamente eficiente para emitir um determinado comprimento de onda de luz (como luz ultravioleta 3650 ou luz azul roxa 4200) através de um sistema de filtro de cores como luz de excitação, que excita substâncias fluorescentes na amostra para emitir várias cores de fluorescência e, em seguida, observa através da ampliação da lente objetiva e da ocular. Desta forma, mesmo com fluorescência fraca em fundo forte, é fácil de reconhecer e possui alta sensibilidade. É usado principalmente para o estudo da estrutura, função e composição química celular. A estrutura básica de um microscópio de fluorescência é composta por um microscópio óptico regular e alguns acessórios, como fonte de luz fluorescente, filtro de excitação, divisor de feixe de duas cores e filtro de bloqueio. A fonte de luz fluorescente - geralmente usa lâmpadas de mercúrio de ultra-pressão (50-200W), que podem emitir luz de vários comprimentos de onda, mas cada substância fluorescente tem um comprimento de onda de luz de excitação que produz a fluorescência mais forte. Portanto, filtros de excitação (geralmente filtros de excitação ultravioleta, roxo, azul e verde) precisam ser adicionados para permitir que apenas um determinado comprimento de onda da luz de excitação passe e irradie a amostra, enquanto absorve todas as outras luzes. Após ser irradiada com luz de excitação, cada substância emite fluorescência visível com comprimento de onda maior que o comprimento de onda da irradiação em um período de tempo muito curto. A fluorescência tem especificidade e geralmente é mais fraca que a luz de excitação. Para observar fluorescência específica, um filtro de bloqueio (ou supressão) precisa ser adicionado atrás da lente objetiva.
Suas funções são duplas: primeiro, absorver e bloquear a entrada de luz de excitação na ocular para evitar perturbar a fluorescência e danificar os olhos; segundo, para selecionar e permitir a passagem de fluorescência específica, exibindo uma cor fluorescente específica. Dois tipos de filtros devem ser usados em combinação.
