O princípio e as características estruturais do microscópio de fluorescência
A microscopia de fluorescência usa um ponto com alta eficiência luminosa para emitir luz de um determinado comprimento de onda (como luz ultravioleta 3650 pol. ou luz azul púrpura 4200 pol.) várias cores Depois disso, observe através da ampliação da lente objetiva e ocular. Desta forma, sob um fundo de forte contraste, mesmo que a fluorescência seja muito fraca, é fácil de identificar e possui alta sensibilidade. É usado principalmente para a pesquisa de estrutura e função celular e composição química. A estrutura básica de um microscópio de fluorescência é composta por um microscópio óptico comum mais alguns acessórios (como uma fonte de luz fluorescente, um filtro de excitação, um divisor de feixe de duas cores e um filtro de bloqueio, etc.). Fonte de luz fluorescente—geralmente usa lâmpada de mercúrio de pressão ultra-alta (50-200W), que pode emitir luz de vários comprimentos de onda, mas cada substância fluorescente tem um comprimento de onda de excitação que produz a fluorescência mais forte, então um filtro de excitação ( Geralmente, existem filtros de excitação ultravioleta, roxo, azul e verde), que permitem apenas que a luz de excitação de um determinado comprimento de onda passe e irradie a amostra, enquanto absorve outra luz. Depois que cada substância é irradiada pela luz de excitação, ela emite fluorescência visível com um comprimento de onda maior que o comprimento de onda de irradiação em um tempo muito curto. A fluorescência é específica e geralmente mais fraca que a luz de excitação. Para observar a fluorescência específica, o bloqueio (ou supressão) deve ser adicionado atrás da lente objetiva e usado em conjunto com ela.
A diferença entre o microscópio de fluorescência e o microscópio comum
1. O método de iluminação geralmente é episcópico, ou seja, a fonte de luz é projetada na amostra através da lente objetiva;
2. A fonte de luz é a luz ultravioleta, o comprimento de onda é mais curto e a resolução é maior do que a dos microscópios comuns;
3. Existem dois filtros especiais, aquele na frente da fonte de luz é usado para filtrar a luz visível, e aquele entre a ocular e a lente objetiva é usado para filtrar os raios ultravioleta para proteger o olho humano.
O microscópio de fluorescência também é um tipo de microscópio óptico, a principal diferença é que o comprimento de onda de excitação dos dois é diferente. Isso determina a diferença entre o microscópio de fluorescência e o microscópio óptico comum em termos de estrutura e uso.
A microscopia de fluorescência é uma ferramenta essencial na citoquímica de imunofluorescência. É composto de componentes principais, como fonte de luz, sistema de placa de filtro e sistema óptico. É usar um certo comprimento de onda de luz para excitar o espécime para emitir fluorescência e observar a imagem de fluorescência do espécime amplificando a lente objetiva e o sistema ocular.
