Técnicas de Observação por Microscopia Óptica
Um microscópio óptico é um instrumento óptico que usa luz como fonte de luz para ampliar e observar estruturas minúsculas que são invisíveis a olho nu. O primeiro microscópio foi feito por um oftalmologista em 1604.
Nas últimas duas décadas, os cientistas descobriram que os microscópios ópticos podem ser usados para detectar, rastrear e obter imagens de objetos menores que a metade do comprimento de onda da luz visível convencional, ou algumas centenas de nanômetros.
Como os microscópios de luz não são tradicionalmente usados para estudar a nanoescala, eles geralmente não têm uma comparação calibrada com um padrão para verificar se os resultados estão corretos para obter informações precisas nessa escala. A microscopia pode indicar de forma precisa e consistente a mesma localização de uma única molécula ou nanopartícula. Ao mesmo tempo, no entanto, pode ser altamente impreciso, e a posição de um objeto identificado por um microscópio com precisão de um bilionésimo de metro pode, na verdade, estar dentro de um milionésimo de metro porque não há erro.
Os microscópios ópticos são comuns entre os instrumentos de laboratório e podem facilmente ampliar diferentes amostras, desde delicadas amostras biológicas até dispositivos elétricos e mecânicos. Da mesma forma, os microscópios ópticos estão se tornando mais capazes e acessíveis, pois combinam a versão científica de luzes e câmeras em seu smartphone.
Métodos Comuns de Observação de Microscopia Óptica
Método de Observação de Interferência de Interferência Diferencial (DIC)
princípio
A luz polarizada é decomposta em feixes mutuamente perpendiculares e de igual intensidade através de um prisma especial, e os feixes passam pelo objeto em dois pontos muito próximos (menor que a resolução do microscópio), de modo que há uma ligeira diferença de fase, fazendo a imagem parecer tridimensional Sentimento tridimensional.
características
Pode fazer com que o objeto sob inspeção produza um efeito estereoscópico tridimensional e o efeito de observação seja mais intuitivo. Nenhuma lente objetiva especial é necessária, funciona melhor com observação de fluorescência e pode ajustar as mudanças de cor do fundo e dos objetos para obter o efeito desejado.
método de observação de campo escuro
Darkfield é, na verdade, iluminação de campo escuro. Suas características são diferentes das do campo claro. Ele não observa diretamente a luz da iluminação, mas observa a luz refletida ou difratada pelo objeto sob inspeção. Portanto, o campo de visão é um fundo escuro, enquanto o objeto sob inspeção apresenta uma imagem clara.
O princípio do campo escuro é baseado no fenômeno Tyndall em óptica. Quando a poeira é passada diretamente por luz forte, o olho humano não pode observá-la, o que é causado pela difração de luz forte. Se a luz for lançada obliquamente sobre ela, devido ao reflexo da luz, a partícula parece aumentar de tamanho e fica visível ao olho humano. Um acessório especial necessário para observação de campo escuro é um condensador de campo escuro. Sua característica é que não permite que o feixe de luz atravesse o objeto de baixo para cima, mas muda o caminho da luz para que dispare obliquamente em direção ao objeto, para que a luz iluminante não entre diretamente na lente objetiva, e usa a luz de reflexão ou difração formada pela superfície do objeto Imagem brilhante. A resolução da observação de campo escuro é muito maior do que a da observação de campo claro, atingindo 0.02-0.004 μm.
