Parâmetros técnicos e habilidades de uso do microscópio de fluorescência
Parâmetros técnicos do microscópio de fluorescência 1. Ocular grande angular 2. Lente objetiva acromática 3. Conversor de lente objetiva de quatro orifícios 4. Dispositivo de fluorescência descendente Sistema de excitação azul (B) Verde (G) 10Lâmpada de mercúrio 0W 5. Coaxial grosso mecanismo de micro focagem: faixa de focagem 15 mm Valor da micro grade 0,002 mm 6. Faixa de movimento longitudinal da bancada mecânica de camada dupla: 70 mm Faixa de movimento lateral: 50 mm
Parâmetros técnicos do microscópio de fluorescência
1. Ocular grande angular
2. Lente objetiva acromática
3. Conversor de lente objetiva de quatro orifícios
4. Dispositivo de fluorescência descendente Azul (B) Verde (G) Sistema de excitação Lâmpada de mercúrio de 100 W
Mecanismo de microfocalização grossa coaxial: faixa de foco: 15mm, valor da micrograde: 0.002mm
6. Bancada mecânica de camada dupla
Faixa de movimento longitudinal: 70 mm Faixa de movimento lateral: 50 mm
Dicas e métodos para usar a microscopia de fluorescência
（1） Slide
A espessura do slide deve estar entre 0,8 e 1,2 mm. Se a lâmina for muito espessa, por um lado, ela absorve muita luz e, por outro lado, não pode causar a concentração de luz de excitação na amostra. A lâmina deve estar lisa e limpa, com espessura uniforme e sem fluorescência espontânea significativa. Às vezes, lâminas de vidro de quartzo são necessárias.
(2) Cobertura de vidro
A espessura do vidro de cobertura é de cerca de 0,17 mm e é lisa e limpa. Para aumentar a excitação, também pode ser usado um vidro de cobertura de interferência. Este é um vidro de cobertura especial revestido com várias camadas de substâncias (como fluoreto de magnésio) que têm diferentes efeitos de interferência em diferentes comprimentos de onda de luz. Ele pode permitir que a fluorescência passe suavemente, enquanto reflete a excitação, o que pode excitar a amostra.
(3) Espécime
As seções de tecido ou outras amostras não devem ser muito grossas. Por exemplo, se forem muito espessos, a maior parte da luz de excitação é consumida na parte inferior da amostra, enquanto a parte superior observada diretamente pela lente objetiva não é suficientemente excitada. Além disso, a sobreposição de células ou o mascaramento de impurezas podem afetar o julgamento.
(4) Agente de montagem
A glicerina é comumente utilizada como agente de montagem, devendo ser isenta de fluorescência espontânea, incolor e transparente. O brilho da fluorescência é mais brilhante em pH 8,5 a 9,5 e não é fácil desbotar rapidamente. Portanto, uma mistura equivalente de glicerol e solução tampão de carbonato 0,5 mol/l com um pH de 9.0 a 9,5 é comumente usada como agente de montagem.
(5) óleo de espelho
Geralmente, ao usar um microscópio de fluorescência de campo escuro e um microscópio de óleo para observar amostras, é necessário usar óleo para lentes. É melhor usar um óleo de lente especial não fluorescente, que também pode ser substituído pelo glicerol mencionado acima. A parafina líquida também pode ser usada, mas o índice de refração é baixo, o que prejudica um pouco a qualidade da imagem.
