Pontos fortes e limitações dos microscópios multifotônicos de varredura a laser
As vantagens são as seguintes:
1. Excitada pela luz vermelha ou infravermelha, a dispersão da luz é pequena (a dispersão de pequenas partículas é inversamente proporcional à quarta potência do comprimento de onda).
2. Não há necessidade de furos, sendo capaz de coletar mais fótons dispersos da seção transversal-da imagem.
3. Os furos não conseguem distinguir fótons dispersos emitidos de áreas desfocadas ou focais, e os multifótons têm melhor relação sinal-para{2}}ruído em imagens profundas.
4. A luz ultravioleta ou visível usada para excitação de fóton único é facilmente absorvida e atenuada pela amostra antes que o feixe atinja o plano focal, dificultando a excitação de camadas profundas.
5. Em termos de observação por microscopia biológica, a primeira consideração é não danificar o estado ativo do próprio organismo e manter a circulação de água, concentração de íons, oxigênio e nutrientes. No campo da observação da luz, tanto a energia térmica quanto a dos fótons devem permanecer dentro da dose de irradiação e da energia luminosa que não danifique as células.
6. A microscopia multifotônica também tem muitas vantagens. Em termos de resolução tri-dimensional, invasão de profundidade, eficiência de espalhamento, luz de fundo, relação sinal-para{4}}ruído, controle, etc., os microscópios a laser têm características incomparáveis ou superiores que os microscópios a laser anteriores não possuíam.
O microscópio confocal de varredura a laser multifotônico foi estendido a vários campos de pesquisa e aplicação Ele pode realizar observações tridimensionais-não destrutivas em amostras em seu estado natural e melhorar a resolução e a relação sinal-para{3}}ruído do sistema Ao utilizar as mudanças nas propriedades do material após a excitação multifóton, o armazenamento de dados de altura tridimensional e a microfabricação tri-dimensional em qualquer direção também podem ser alcançados, o que tem alto valor de aplicação. Acredita-se que, com o desenvolvimento de tecnologias mecânicas, de materiais e de laser relacionadas à microscopia confocal multifotônica, a microscopia confocal de varredura a laser multifotônica terá maior desenvolvimento e aplicações mais amplas
As desvantagens são as seguintes:
1. Somente para imagens de fluorescência.
2. Se a amostra incluir cromóforos que possam absorver luz de excitação, como pigmentos, a amostra poderá estar sujeita a danos térmicos.
3. A resolução é ligeiramente reduzida, embora possa ser melhorada utilizando simultaneamente pequenos orifícios confocais, haverá perda de sinal.
4. Devido às limitações dos lasers ultrarrápidos caros, o custo dos microscópios de varredura multifotônica é relativamente alto.
