Princípios e características estruturais da microscopia de fluorescência
Microscópio de fluorescência é o uso de uma alta eficiência luminosa da fonte de luz pontual, através do sistema de filtragem de cores para emitir um determinado comprimento de onda de luz (como ultravioleta 3650 ou azul violeta 4200) como a luz de excitação, a excitação de material fluorescente dentro a amostra emite uma variedade de cores diferentes de fluorescência e, em seguida, ampliada através da objetiva e das oculares para observação. Desta forma, no fundo de forte contraste, mesmo que a fluorescência seja muito fraca, é de fácil identificação, alta sensibilidade, utilizada principalmente para o estudo da estrutura e função celular e composição química. A estrutura básica de um microscópio de fluorescência é composta por um microscópio óptico comum mais alguns acessórios (como fonte de luz de fluorescência, filtros de excitação, separador de feixe de duas cores e filtros de bloqueio, etc.). Fonte de luz fluorescente - geralmente usada lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão (50-200W), que pode emitir uma variedade de comprimentos de onda de luz, mas cada material fluorescente tem um comprimento de onda de excitação de fluorescência mais forte, então a necessidade de adicionar filtros de excitação (geralmente filtro de excitação ultravioleta, violeta, azul e verde), de modo que apenas um determinado comprimento de onda da luz de excitação através da irradiação das amostras, enquanto a outra luz é absorvida. Portanto, é necessário adicionar um filtro de excitação (geralmente filtros de excitação ultravioleta, violeta, azul e verde), de modo que apenas um certo comprimento de onda da luz de excitação através da amostra, enquanto outra luz é absorvida. Quando cada substância é irradiada com luz de excitação, ela emite fluorescência visível de comprimento de onda maior do que a da luz irradiada em um tempo muito curto. A fluorescência tem uma especificidade, geralmente mais fraca que a luz de excitação, para poder observar a fluorescência específica, na lente objetiva por trás da necessidade de adicionar um filtro de bloqueio (ou supressão).
Seu papel é duplo:
Uma delas é absorver e bloquear a luz de excitação na ocular, para não perturbar a fluorescência e causar danos aos olhos.
A segunda é selecionar e deixar passar a fluorescência específica, mostrando uma cor fluorescente específica. Os dois tipos de filtros devem ser selecionados e usados em conjunto.
