Preparação e observação de amostras biológicas para microscópios eletrônicos
A resolução de um microscópio depende do comprimento de onda da luz utilizada. O microscópio eletrônico, que surgiu em 1933, alcançou resolução significativamente maior do que um microscópio óptico devido ao uso de feixes de elétrons com comprimentos de onda muito mais curtos que a luz visível como fontes de luz. As diferentes fontes de luz também determinam uma série de diferenças entre microscópios eletrônicos e microscópios ópticos.
Com base nas diferenças nos princípios da imagem por feixe de elétrons e nas maneiras como eles agem nas amostras, os microscópios eletrônicos modernos se desenvolveram em vários tipos. Atualmente, os mais utilizados são microscópios eletrônicos de transmissão e microscópios eletrônicos de varredura. O primeiro tem uma ampliação total que pode variar entre 1.000-1.000.000 vezes, enquanto o último tem uma ampliação total que pode variar entre 20-300.000 vezes. Este experimento apresenta principalmente a preparação de dois tipos de amostras de microscópio, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia eletrônica de varredura.
2, Equipamento
1. A cepa Escherichia coli é inclinada.
2. Solução ou reagente: acetato de pentil, ácido sulfúrico concentrado, etanol anidro, água estéril, solução aquosa de fosfotungstato de sódio a 2% (pH 6,5-8,0), solução de formaldeído de polivinila a 0,3% (dissolvido em clorofórmio), citocromo c, acetato de amônio, plasmídeo pBR322.
3. Instrumentos ou outras ferramentas incluem microscópios ópticos comuns, redes de cobre, funis de porcelana, copos, placas de Petri, conta-gotas estéreis, pinças estéreis, alfinetes, lâminas de vidro, placas de contagem, máquinas de revestimento a vácuo, secadores de ponto crítico, etc.
3, etapas de operação
(1) Preparação e Observação de Amostras para Microscopia Eletrônica de Transmissão
1. Tratamento de malha metálica
A amostra de um microscópio óptico é colocada em uma lâmina de vidro para observação. No entanto, num espelho de transmissão, uma vez que os electrões não podem penetrar na folha de vidro, um material de malha só pode ser utilizado como transportador, vulgarmente referido como malha transportadora. A malha transportadora pode ser dividida em várias especificações devido aos diferentes materiais e formatos, entre os quais é comumente utilizada malha de cobre com malha 200-400 (número de furos). A malha de cobre deve ser tratada antes do uso para remover qualquer sujeira e mantê-la limpa, caso contrário afetará a qualidade do filme de suporte e a clareza das fotos da amostra. A malha de cobre de malha 400 usada neste experimento pode ser tratada pelo seguinte método: primeiro, mergulhe e flutue com acetato de pentila por algumas horas, depois enxágue várias vezes com água destilada e, finalmente, mergulhe e flutue a malha de cobre em etanol anidro para desidratação. Se a malha de cobre ainda não estiver limpa após os métodos acima, ela pode ser embebida em ácido sulfúrico concentrado diluído (1:1) por 1-2 minutos, ou fervida em solução de NaOH a 1% por alguns minutos, enxaguada várias vezes com água destilada e depois desidratada em etanol anidro para uso posterior.
