Medidor de PH - Determinação e ajuste do pH do meio
Todos os microrganismos são afetados pelo pH do ambiente em que vivem. Freqüentemente, a presença de espécies seletivas restringe a faixa de pH na qual elas crescem. Às vezes, a acidez ou alcalinidade do meio também pode atuar como um fator de seleção de crescimento. Para meios de teste bioquímicos, no entanto, a faixa de pH na qual os microrganismos exibem atividade tk no substrato é mais estreita do que a faixa de pH necessária para o crescimento: portanto, é importante ajustar o pH do meio para a faixa esperada. Quando o laboratório prepara o meio de acordo com a composição do meio, o pH deve ser verificado e ajustado. Deve-se ressaltar que mesmo para o meio desidratado sintético pronto fornecido pelo fabricante (especialmente para alguns meios desidratados estoque), o pH final precisa ser medido após a fabricação do meio experimental.
A maneira mais precisa de medir o pH de um meio é com um medidor de pH. Antes de usar, deve ser calibrado com uma solução tampão padrão de pH conhecido (normalmente o pH é de 4 a 7). Enxágue o eletrodo do medidor de pH com água destilada e mergulhe-o no meio de cultura no béquer e, em seguida, leia o pH do meio de cultura na escala do medidor de pH. Cada fabricante fornece instruções operacionais detalhadas para cada tipo de medidor de pH.
Ao preparar o meio de cultura, o PH pode ser facilmente ajustado usando um medidor de pH com agitação mecânica. O meio de cultura deve ser preparado em um recipiente (como um béquer grande) que possa ser agitado continuamente. ou imãs envoltos em Teflon. O pH do meio contendo ágar precisa ser ajustado após o descongelamento, o que é feito facilmente com um agitador magnético aquecível. Ao ajustar o pH, use uma solução tampão padrão de pH conhecido para calibrar o medidor de pH primeiro. Em seguida, coloque o eletrodo composto e o termômetro de resistência (se houver) no meio, adicione lentamente a quantidade apropriada de ácido clorídrico e hidróxido de sódio da extremidade do béquer longe do eletrodo, para que o meio possa atingir e manter o pH necessário.
A compensação de temperatura do medidor de pH deve levar em consideração o efeito da temperatura no sistema de eletrodos: em algumas diluições e meios, o pH muda consideravelmente com a temperatura. Para meios líquidos e diluições, o pH geralmente pode ser ajustado e medido a 25 graus ou na temperatura em que são usados.
O pH do meio ágar deve ser ajustado após a dissolução, e a temperatura de dissolução é superior a 45 graus: portanto, o pH do meio sólido deve ser determinado em sua temperatura de uso. Neste momento, um eletrodo composto de cabeça chata deve ser usado e a compensação de temperatura do medidor de pH deve ser calibrada manualmente. Ao preparar o meio de cultura, se for determinado que o pH do meio de cultura é diferente entre o estado de fusão e o estado de solidificação, significa que há um erro no ajuste do pH.
Da mesma forma, quando o meio preparado é esterilizado por calor (por exemplo, autoclavado), também pode sofrer alterações de pH. Para o meio desidratado, o fabricante leva isso em consideração, e geralmente não há necessidade de ajustar o pH, mas o pH do meio a ser utilizado deve ser cuidadosamente verificado. Se o pH do meio de ágar desidratado precisar ser ajustado durante a redissolução ou preparação, é melhor ajustá-lo com ácido clorídrico esterilizado por filtração e solução de hidróxido de sódio após a etapa de esterilização para evitar a formação de superaquecimento do meio. Ao preparar meios com diferentes matérias-primas ou produtos farmacêuticos, o pH dos meios deve ser verificado após a autoclavagem. Além disso, se o pH do meio mudar após cada autoclave, o pH pode ser ajustado apropriadamente ao preparar o meio. No entanto, ainda é necessário determinar o pH final do meio após a esterilização.
