Medição da Quantidade Microbiana - Método de Contagem Microscópica Direta!
O crescimento das populações bacterianas é caracterizado por um aumento no número de células ou um aumento no material celular. Existem vários métodos para medir o número de células, incluindo contagem microscópica direta, contagem em placas, turbometria por espectrofotômetro, número mais provável MPN e filtração por membrana. Os métodos para medir substâncias celulares incluem medir o peso seco das células, medir o conteúdo de certos componentes das células, como nitrogênio, RNA e DNA, e medir produtos metabólicos. Em resumo, existem muitos métodos para medir o crescimento microbiano, cada um com suas vantagens e desvantagens, e a seleção deve ser baseada em requisitos específicos do trabalho. Este experimento apresenta principalmente o método de contagem direta de microscópio comumente usado em trabalhos de produção e pesquisa científica.
Requisitos de finalidade
1. Esclareça o princípio do uso de uma placa de contagem de células sanguíneas para contagem.
2. Dominar o método de utilização de uma placa de contagem de células sanguíneas para contagem microbiana.
2, Princípios Básicos
O método microscópico de contagem direta é um método simples, rápido e intuitivo de contar diretamente uma pequena quantidade de suspensão de uma amostra sob um microscópio, colocando-a em uma lâmina de vidro especial com uma determinada área e volume (também conhecido como contador bacteriano). Atualmente, os dispositivos de contagem bacteriana comumente usados no país e no exterior incluem placas de contagem de células sanguíneas, dispositivos de contagem bacteriana Peteroff Hauser e dispositivos de contagem bacteriana Hawksley, todos os quais podem ser usados para contar suspensões de leveduras, bactérias, esporos de fungos, etc., com o mesmo princípio básico. Os dois últimos tipos de contadores bacterianos têm um volume total de {{0}},02 mm3 após serem cobertos com uma lamínula, e a distância entre a lamínula e a lâmina transportadora é de apenas 0,02 mm. Portanto, uma objetiva de imersão em óleo pode ser usada para observar e contar células menores, como bactérias. Além de usar esses contadores bacterianos, existe também um método de estimativa para observar diretamente a proporção entre a área do esfregaço e a área do campo ao microscópio, que geralmente é usado para exame bacteriológico do leite. As vantagens da contagem direta com microscópio são intuitivas, rápidas e fáceis de operar. Mas a desvantagem deste método é que os resultados medidos são geralmente a soma de células vivas e mortas. Actualmente, existem alguns métodos que podem superar esta desvantagem, tais como combinar cultura de câmara de coloração de células vivas (curto tempo) e adicionar inibidores de divisão celular para atingir o objectivo de contar apenas células vivas.
Usando uma placa de contagem de células sanguíneas como exemplo para contagem direta ao microscópio. Os métodos de utilização dos outros dois contadores bacterianos podem ser encontrados nos manuais de diversos fabricantes. A contagem direta ao microscópio usando uma placa de contagem de células sanguíneas é um método comumente usado para contagem microbiana. O tabuleiro de contagem é uma lâmina de vidro especialmente feita com quatro ranhuras formando três plataformas; A plataforma mais larga no meio é dividida em duas metades por uma pequena ranhura horizontal e há uma grade em cada lado da plataforma. Cada grade é dividida em nove grades grandes, e a grade grande no meio é a sala de contagem. A estrutura da placa de contagem de células sanguíneas é mostrada na Figura l{{0}}. A escala da sala de contagem geralmente possui duas especificações. Uma é que um quadrado grande é dividido em 25 quadrados médios, e cada quadrado é dividido em 16 quadrados pequenos (Figura 15-2); Outro método é dividir um quadrado grande em 16 quadrados médios, e cada quadrado é dividido em 25 quadrados pequenos. No entanto, independentemente do tamanho do tabuleiro de contagem, existem 400 quadrados pequenos em cada quadrado grande. Se o comprimento do lado de cada quadrado for 1mm, a área de cada quadrado grande será lmm2. Após a cobertura com uma lamínula, a altura entre a lamínula e a lâmina é de 0,1 mm, portanto o volume da sala de contagem é de 0,1 mm3 (um milésimo de mililitro). Figura 15-1 Estrutura do Quadro de Contagem de Células Sanguíneas (I) Figura 15-2 Estrutura do Quadro de Contagem de Células Sanguíneas (II) A Vista frontal; B. Vista em corte vertical; A grade ampliada tem um grande quadrado no meio como a sala de contagem 1. Quadro de contagem de células sanguíneas; 2. Tampa de vidro; Na contagem na sala de contagem, a contagem bacteriana total geralmente é calculada para cinco quadrados, então obtém-se o valor médio de cada quadrado, multiplicado por 25 ou 16 para obter a contagem bacteriana total em um quadrado grande, que é então convertido no contagem bacteriana total na solução bacteriana lml. Supondo que a contagem bacteriana total em cinco grades quadradas seja A e o fator de diluição da solução bacteriana seja B. Se houver 25 placas de contagem na grade quadrada, a contagem bacteriana total em 1mL de solução bacteriana é A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Da mesma forma, se houver 16 placas de contagem na grade quadrada, a contagem bacteriana total em 1mL de solução bacteriana é A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
