Introdução às vantagens e desvantagens do microscópio de varredura a laser multifotônico
Vantagens da microscopia de varredura a laser multifotônica:
1. Excitado pela luz vermelha ou infravermelha, a dispersão da luz é pequena e a dispersão de pequenas partículas é inversamente proporcional à quarta potência do comprimento de onda.
2. Mais fótons dispersos da seção de imagem podem ser coletados sem furos.
3. O pinhole não consegue distinguir os fótons dispersos emitidos da área fora de foco ou da área de foco, e a relação sinal-ruído da imagem multifóton em camadas profundas é boa.
4. A luz ultravioleta ou visível usada para excitação de fóton único é facilmente absorvida e atenuada pela amostra antes que o feixe atinja o plano focal e não é fácil excitar camadas profundas.
5. Em termos de observação por microscópio biológico, a primeira consideração é não danificar o estado ativo do próprio organismo e manter a circulação de água, concentração de íons, oxigênio e nutrientes. No caso da observação da luz, tanto a energia térmica quanto a dos fótons devem permanecer dentro da quantidade de irradiação e da energia luminosa que não danifique as células.
6. A microscopia multifotônica tem muitas vantagens. Tais como resolução tridimensional, penetração profunda, eficiência de espalhamento, luz de fundo, relação sinal-ruído, controle, etc., todos possuem características que os microscópios a laser anteriores não tinham ou não podiam superar.
Desvantagens da microscopia de varredura a laser multifotônica:
1. Somente para imagens de fluorescência.
2. Se a amostra incluir cromóforos que absorvem luz de excitação, a amostra poderá ser danificada termicamente.
3. A resolução é ligeiramente reduzida. Embora possa ser melhorado usando a abertura confocal ao mesmo tempo, o sinal é perdido.
4. Devido à limitação de lasers ultrarrápidos caros, o custo do microscópio de varredura multifotônica é relativamente alto.
