Introdução às vantagens e desvantagens dos microscópios multifotônicos de varredura a laser
Vantagens do microscópio de varredura a laser multifotônico:
1. Excitada pela luz vermelha ou infravermelha, a dispersão da luz é pequena e a dispersão de pequenas partículas é inversamente proporcional à quarta potência do comprimento de onda.
2. Mais fótons dispersos da seção transversal-da imagem podem ser coletados sem a necessidade de furos.
3. Os furos não conseguem distinguir fótons dispersos emitidos de áreas desfocadas ou focais, e os multifótons têm melhor relação sinal-para{2}}ruído em imagens profundas.
4. A luz ultravioleta ou visível usada para excitação de fóton único é facilmente absorvida e atenuada pela amostra antes que o feixe atinja o plano focal, dificultando a excitação de camadas profundas.
5. Em termos de observação por microscopia biológica, a primeira consideração é não danificar o estado ativo do próprio organismo, manter a circulação de água, concentração de íons, oxigênio e nutrientes. No campo da observação da luz, tanto a energia térmica quanto a dos fótons devem permanecer dentro da dose de irradiação e da energia luminosa que não danifique as células.
6. A microscopia multifotônica tem muitas vantagens. Em termos de resolução tri-dimensional, invasão de profundidade, eficiência de espalhamento, luz de fundo, relação sinal-para{4}}ruído, controle, etc., existem características que os microscópios a laser anteriores não possuem ou não podem superar
Desvantagens do microscópio de varredura a laser multifotônico:
1. Somente para imagens de fluorescência.
2. Se a amostra incluir cromóforos que possam absorver luz de excitação, a amostra poderá estar sujeita a danos térmicos.
3. A resolução é ligeiramente reduzida, embora possa ser melhorada utilizando simultaneamente pequenos orifícios confocais, há perda de sinal.
4. Devido às limitações dos caros lasers ultrarrápidos, o custo dos microscópios de varredura multifotônica é relativamente alto.
