Introdução à escolha entre microscópios invertidos e microscópios de fluorescência
O microscópio é um instrumento importante na cultura celular e em experimentos derivados relacionados. Atualmente existem vários tipos de microscópios no mercado, e escolher um microscópio que atenda às necessidades e seja adequado é um desafio. Abaixo, apresentaremos os princípios dos microscópios invertidos e dos microscópios de fluorescência para facilitar a seleção.
A composição de um microscópio invertido é a mesma de um microscópio normal, consistindo principalmente de três partes: parte mecânica, parte de iluminação e parte óptica. A composição de um microscópio invertido é a mesma de um microscópio vertical normal, exceto que a lente objetiva e o sistema de iluminação são invertidos, com o primeiro abaixo da platina e o último acima da platina. Esta estrutura permite um aumento significativo na distância efetiva entre o sistema de foco de iluminação e a platina, facilitando a colocação de instrumentos de observação mais grossos, como placas de cultura e frascos de cultura celular (é claro, lâminas de vidro também são aceitáveis), enquanto a distância de trabalho entre a lente objetiva e o material não precisa ser muito grande. O microscópio invertido é usado por instituições médicas e de saúde, universidades e institutos de pesquisa para observar microorganismos, células, bactérias, cultura de tecidos, suspensões, sedimentos, etc. Ele pode observar continuamente o processo de reprodução e divisão celular e bacteriana em meio de cultura, e pode capturar qualquer estado durante este processo. Amplamente utilizado em áreas como citologia, parasitologia, oncologia, imunologia, engenharia genética, microbiologia industrial, botânica, etc.
A microscopia de fluorescência é usada para estudar a absorção, transporte, distribuição e localização de substâncias dentro das células. Para o objeto testado, existem duas formas de gerar fluorescência: fluorescência espontânea, que emite fluorescência diretamente após irradiação UV; A fluorescência secundária ocorre quando o objeto observado é tratado com corantes fluorescentes e depois irradiado com luz ultravioleta para emitir fluorescência. Algumas substâncias nas células, como a clorofila, produzem fluorescência espontânea quando expostas à radiação ultravioleta; Algumas substâncias por si só não podem emitir fluorescência, mas se coradas com corantes fluorescentes ou anticorpos fluorescentes, também podem emitir fluorescência secundária após serem irradiadas com luz ultravioleta. O microscópio de fluorescência usa uma fonte de luz pontual altamente eficiente para emitir um determinado comprimento de onda de luz (luz ultravioleta 365 nm ou luz azul roxa 420 nm) através de um sistema de filtro de cores como luz de excitação, que excita as substâncias fluorescentes dentro da amostra para emitir várias cores de fluorescência, e então observa através da ampliação da lente objetiva e da ocular. Desta forma, mesmo com fluorescência fraca em fundo forte, é fácil de reconhecer e possui alta sensibilidade. É usado principalmente para o estudo da estrutura, função e composição química celular.
