Vantagens aprimoradas da microscopia multifotônica de varredura a laser
A microscopia multifotônica de varredura a laser é uma grande melhoria da microscopia óptica, principalmente para observar a estrutura profunda de células vivas, células fixas e tecidos, e pode obter estruturas de plano Z multicamadas claras e nítidas, ou seja, fatias ópticas, e pode construir A estrutura sólida tridimensional do espécime. O microscópio confocal usa uma fonte de luz laser, que é expandida para preencher todo o plano focal traseiro da lente objetiva e, em seguida, converge para um ponto muito pequeno no plano focal da amostra através do sistema de lentes da lente objetiva. Dependendo da abertura numérica da lente objetiva, o diâmetro do ponto de iluminação mais brilhante é de cerca de 0,25 ~ 0,8 μm, e a profundidade é de cerca de 0,5 ~ 1,5 μm. O tamanho do ponto confocal depende do projeto do microscópio, do comprimento de onda do laser, das características da lente objetiva, da configuração do estado da unidade de varredura e da natureza da amostra. Os microscópios de campo têm uma ampla faixa de iluminação e uma grande profundidade de iluminação, enquanto os microscópios confocais têm iluminação concentrada em um ponto focal no plano focal. A vantagem mais básica da microscopia confocal é que ela pode realizar cortes ópticos finos de espécimes fluorescentes espessos (até 50 μm ou mais), com uma espessura de cerca de 0,5 a 1,5 μm. Uma série de imagens de seção óptica pode ser obtida movendo a amostra para cima e para baixo com o motor de passo do eixo Z do microscópio. A aquisição de informações de imagem é controlada dentro do plano e não sofrerá interferência de sinais de outros locais no espécime. Depois de remover o efeito da fluorescência de fundo e aumentar a relação sinal-ruído, o contraste e a resolução das imagens confocais são significativamente melhorados em comparação com as imagens tradicionais de fluorescência de iluminação de campo. Em muitos espécimes, muitos componentes estruturais intrincados estão entrelaçados para formar sistemas complexos, mas uma vez que seções ópticas suficientes podem ser coletadas, podemos reconstruí-las em 3D por meio de software. Esta abordagem experimental tem sido amplamente utilizada em pesquisas biológicas para elucidar as complexas relações estruturais e funcionais entre células ou tecidos.
