Como escolher entre microscópio invertido e microscópio de fluorescência?
O microscópio é um instrumento importante na cultura celular e em experimentos derivados relacionados. Atualmente existem vários tipos de microscópios no mercado, e escolher um microscópio que atenda às necessidades e seja adequado é um desafio. Abaixo, apresentaremos os princípios dos microscópios invertidos e dos microscópios de fluorescência para que todos possam escolher.
O microscópio invertido, como um microscópio normal, consiste principalmente em três partes: parte mecânica, parte de iluminação e parte óptica. A composição de um microscópio invertido é a mesma de um microscópio vertical normal, exceto que a lente objetiva e o sistema de iluminação são invertidos, com a primeira sob a platina e a última acima da platina. Esta estrutura expande significativamente a distância efetiva entre o sistema de holofotes de iluminação e o palco, facilitando a colocação de ferramentas de observação mais espessas, como pratos de cultura e frascos de cultura celular (é claro, lâminas de vidro também podem ser usadas), enquanto a distância de trabalho entre o lente objetiva e o material não precisa ser muito grande. O microscópio invertido é usado por instituições médicas e de saúde, universidades e institutos de pesquisa para observar microrganismos, células, bactérias, culturas de tecidos, suspensões, sedimentos, etc. Ele pode observar continuamente o processo de proliferação e divisão celular e bacteriana em meio de cultura, e pode capturar qualquer forma desse processo. Amplamente utilizado em áreas como citologia, parasitologia, oncologia, imunologia, engenharia genética, microbiologia industrial e botânica.
A microscopia de fluorescência é usada para estudar a absorção, transporte, distribuição e localização de substâncias dentro das células. Para o objeto testado, existem duas formas de gerar fluorescência: fluorescência espontânea, que é emitida diretamente pela irradiação ultravioleta; A fluorescência secundária ocorre quando o objeto observado é tratado com corantes fluorescentes e exposto à luz ultravioleta antes de emitir fluorescência. Algumas substâncias nas células, como a clorofila, produzem fluorescência espontânea após serem expostas à radiação ultravioleta; Algumas substâncias em si podem não emitir fluorescência, mas se coradas com corantes fluorescentes ou anticorpos fluorescentes, também podem emitir fluorescência secundária sob radiação ultravioleta. Um microscópio de fluorescência usa uma fonte de luz pontual de alta eficiência luminosa para emitir um determinado comprimento de onda de luz (UV 365 nm ou azul UV 420 nm) através de um sistema de filtragem de cores como luz de excitação, que excita as substâncias fluorescentes na amostra para emitir várias cores de fluorescência. Depois disso, é observado através da ampliação da lente objetiva e da ocular. Desta forma, mesmo com fluorescência fraca, é facilmente reconhecível e altamente sensível sob fundos fortemente contrastantes. É usado principalmente para estudar a estrutura, função e composição química celular.
A microscopia de fluorescência pode ser dividida em dois tipos: tipo de transmissão e tipo de queda. O primeiro é mais primitivo, enquanto o segundo é mais avançado. A construção básica dos dois tipos de microscópios de fluorescência é semelhante, com a principal diferença sendo que a luz de excitação transmitida passa através da amostra, produzindo a fluorescência como um todo. A fluorescência entra então na lente objetiva e quanto maior a ampliação, mais fraca é a fluorescência; A luz de excitação descendente se projeta na superfície da amostra, produzindo fluorescência que entra na lente objetiva. Quanto maior a ampliação, mais forte será a fluorescência, tornando-o adequado para observação de alta potência. Os principais componentes de um microscópio de fluorescência incluem uma fonte de luz de lâmpada de mercúrio, uma placa de filtro de excitação, um espectrofotômetro (tipo gota), uma placa de filtro de supressão e um condensador de campo escuro (tipo de transmissão). Além disso, devido ao forte aquecimento das lâmpadas de mercúrio, a maioria delas também está equipada com filtros de absorção de calor. Alguns microscópios de fluorescência também possuem uma objetiva de contraste de fase e uma abertura circular, permitindo a observação do contraste de fase. Alguns microscópios de fluorescência adotam uma estrutura invertida, que também é um microscópio invertido, e assim por diante.
Além disso, os microscópios acima mencionados podem ser montados em microscópios digitais através da instalação do CCD, que converte as imagens físicas vistas pelo microscópio em imagens digitais analógicas e as reproduz em um computador. Como resultado, podemos mudar a nossa investigação no campo micro da observação binocular tradicional para a reprodução através de monitores, melhorando assim a eficiência do trabalho.
