Como a microscopia de fluorescência difere da microscopia confocal a laser
Microscópio de fluorescência
1, microscópio de fluorescência consiste em usar luz ultravioleta como fonte de luz, usada para irradiar o objeto a ser examinado, de modo que emita fluorescência, e então observar a forma do objeto e sua localização ao microscópio. O microscópio de fluorescência é usado para estudar a absorção, transporte, distribuição e localização de substâncias químicas nas células. Algumas substâncias na célula, como a clorofila, podem apresentar fluorescência após irradiação com luz ultravioleta; existem algumas substâncias que não podem fluorescer por si mesmas, mas se coradas com corantes fluorescentes ou anticorpos fluorescentes, também podem fluorescer após irradiação com luz ultravioleta, e a microscopia de fluorescência é uma das ferramentas para pesquisa qualitativa e quantitativa deste tipo de substâncias.
2, princípio do microscópio de fluorescência:
(A) fonte de luz: a fonte de luz irradia vários comprimentos de onda de luz (do ultravioleta ao infravermelho).
(B) fonte de filtro de excitação: através da amostra pode produzir fluorescência de um comprimento de onda específico de luz, enquanto bloqueia a excitação de luz fluorescente inútil.
(C) Amostra fluorescente: geralmente corada com fluorocromo.
(D) Filtros de bloqueio: bloqueiam a luz de excitação que não é absorvida pela amostra para transmitir seletivamente a fluorescência, e alguns comprimentos de onda na fluorescência também são transmitidos seletivamente. Um microscópio que usa luz ultravioleta como fonte de luz para tornar o objeto irradiado fluorescente. O microscópio eletrônico foi montado pela primeira vez em 1931 em Berlim, Alemanha, por Knorr e Haroska. Este microscópio usa um feixe de elétrons de alta velocidade em vez de um feixe de luz. Como o comprimento de onda do fluxo de elétrons é muito mais curto que a onda de luz, a ampliação do microscópio eletrônico pode ser de até 800,000 vezes, a resolução do limite mínimo de 0,2 nanômetros . 1963 começou a usar o microscópio eletrônico de varredura pode ser visto na superfície da pequena estrutura do objeto.
3, o escopo de aplicação: usado para ampliar a imagem de pequenos objetos. Geralmente usado em biologia, medicina, partículas microscópicas e outras observações.
Microscópio confocal
1, microscópio confocal na luz refletida na estrada mais uma meia lente semi-reflexiva, terá passado pela lente da luz refletida dobrada em outras direções, em seu foco em um defletor com um orifício, o orifício está localizado em o foco, atrás do defletor está um tubo fotomultiplicador. Pode-se imaginar que a luz refletida antes e depois do ponto focal da luz do detector através deste conjunto de sistema confocal, não conseguirá focar no pequeno orifício, será bloqueada pelo defletor. Assim, o fotômetro mede a intensidade da luz refletida no ponto focal.
2, princípio: o microscópio óptico tradicional usa uma fonte de luz de campo, a imagem de cada ponto da amostra sofrerá interferência da difração ou dispersão da luz de pontos vizinhos; O microscópio confocal de varredura a laser usa um feixe de laser através do orifício de iluminação para formar uma fonte pontual de luz na amostra no plano focal da digitalização de cada ponto da amostra, a amostra é irradiada, na detecção do orifício na imagem , pela detecção do furo após o tubo fotomultiplicador (PMT) ou o dispositivo de eletroacoplamento frio (cCCD) ponto a ponto ou ponto a ponto ou ponto a ponto, a intensidade da luz é medida por um fotômetro. cCCD) recebe ponto por ponto ou linha por linha e forma rapidamente uma imagem fluorescente na tela do monitor do computador. O pinhole de iluminação e o pinhole de detecção em relação ao plano focal da lente objetiva são conjugados, o ponto no plano focal ao mesmo tempo focando no pinhole de iluminação e no pinhole de emissão, o ponto fora do plano focal não estará no pinhole de detecção em a imagem, de modo que a imagem confocal seja o espécime da seção transversal óptica, superando as deficiências das imagens borradas dos microscópios comuns.
3, Campos de aplicação: medicina, pesquisa animal e vegetal, bioquímica, bacteriologia, biologia celular, embriologia de tecidos, ciência alimentar, genética, farmacologia, fisiologia, óptica, patologia, botânica, neurociência, biologia marinha, ciência dos materiais, ciência eletrônica, mecânica, geologia do petróleo, mineralogia.
