Funções de cada filtro em um microscópio de fluorescência
A questão mais crítica da microscopia de fluorescência é a combinação de filtros ópticos. Tanto o filtro de excitação quanto o filtro de blindagem devem ser adequados para o material fluorescente observado e combinados entre si. Para algumas aplicações específicas, se houver erros na seleção dos filtros, isso poderá levar a mal-entendidos e até mesmo a resultados incorretos. As conquistas da tecnologia de microscopia de fluorescência são inseparáveis de filtros de alta-qualidade e grupos de filtros habilmente combinados. Existem vários tipos de filtros para microscopia de fluorescência.
1. Filtro absorvente de calor
O filtro de absorção de calor é um filtro necessário para evitar que a radiação térmica no espectro da fonte de luz danifique o sistema óptico. Os primeiros microscópios avançados eram equipados com garrafas em forma de tambor que podiam conter água destilada como dispositivos de absorção de calor. Os modernos microscópios de pesquisa em grande-escala são equipados com filtros de vidro que absorvem calor em caixas de luz de fontes de luz ou câmaras de lâmpadas, que são folhas de vidro transparentes e levemente amareladas. Os filtros KG1 (2 mm) e BG38 (4 mm) da Leitz podem transmitir quase todos os espectros de luz ultravioleta e visível, com uma taxa de transmissão de luz de até 98%. Ele absorve apenas seletivamente a radiação fototérmica infravermelha.
2. Filtro de excitação
Os filtros de excitação podem absorver seletivamente linhas espectrais de comprimento de onda longo e transmitir apenas luz ultravioleta. Os filtros de luz roxa, azul e verde são filtros de excitação. Zeiss, Reichert, série B da Olympus, série G, série BG, série UG de Shott, série H, G, BP de Opton, série BP de Leitz e outros filtros ópticos são todos filtros de excitação.
3. Filtro de bloqueio
Um filtro de bloqueio é um filtro que absorve seletivamente linhas espectrais de ondas curtas e raios infravermelhos, ao mesmo tempo que permite a visualização de ondas mais longas. Sua função é permitir que o observador veja a fluorescência excitada pelo objeto que está sendo inspecionado, ao mesmo tempo que protege a córnea do observador contra danos UV.
4. Filtro de separação de cores
O filtro de separação de cores é um espelho de filtro que reflete a luz de excitação no objeto que está sendo inspecionado, fazendo com que o objeto emita fluorescência e, em seguida, transmita a fluorescência para a ocular. Este tipo de filtro só pode ser usado em um condensador de luz incidente, enquanto um microscópio de fluorescência de luz transmitida não requer separação de cores.
5. Filtro de interferência
O filtro de interferência é um tipo de filtro de excitação de alto-desempenho. É um filtro feito empilhando vários filmes finos de metal entre duas folhas de vidro polido. O índice de refração de cada filme metálico fino é diferente, de modo que as linhas espectrais de vários comprimentos de onda da fonte de luz de iluminação são repetidamente refletidas em cada filme metálico. Algumas linhas espectrais de certos comprimentos de onda são canceladas por interferência destrutiva, enquanto outras são reforçadas por interferência aditiva e transmitidas. Isso resulta em um filtro com um espectro de transmissão estreito e largura de meio pico de apenas 6-20 nm. A transmitância pode chegar a 60% -70%.
