Os microscópios de fluorescência podem ser divididos em dois tipos de acordo com o princípio do caminho da luz:
1. Microscópio de fluorescência de transmissão
Em microscópios de fluorescência mais antigos, a fonte de luz de excitação passa através do material da amostra através de um condensador para excitar a fluorescência. A vantagem é que a fluorescência é forte em baixa ampliação, mas a desvantagem é que a fluorescência enfraquece à medida que a ampliação aumenta. Portanto, é adequado apenas para observar materiais de amostras maiores.
2. Microscopia de epifluorescência
A luz de excitação cai da lente objetiva para a superfície da amostra, ou seja, a mesma lente objetiva é usada como condensador de iluminação e lente objetiva para coletar a fluorescência.
Um divisor de feixe dicróico (espelho dicróico) precisa ser adicionado ao caminho óptico, que forma um ângulo de 45o em relação ao eixo óptico. A luz de excitação é refletida na lente objetiva e concentrada na amostra. A fluorescência gerada pela amostra é refletida pela superfície da lente objetiva e pela tampa. A luz de excitação refletida na superfície da lâmina de vidro entra na lente objetiva ao mesmo tempo e retorna ao divisor de feixe dicróico para separar a luz de excitação e a fluorescência. A luz de excitação restante é então absorvida pelo filtro de bloqueio. Se você usar diferentes inserções de combinação de filtro de excitação/divisor de feixe de duas cores/filtro de bloqueio, poderá atender às necessidades de diferentes produtos de reação de fluorescência.
A vantagem deste tipo de microscópio de fluorescência é que o campo de visão é iluminado uniformemente, a imagem é nítida e quanto maior a ampliação, mais forte será a fluorescência.
Quais são as principais categorias de microscópios ópticos?
1. Microscópio óptico comum
Os microscópios ópticos comuns são compostos principalmente pelas seguintes partes: o sistema de iluminação, que envolve a fonte de luz e o condensador; o sistema de ampliação óptica, que é composto pela lente objetiva e pela ocular. É a parte mais crítica do microscópio e foi projetada para evitar aberração esférica excessiva e aberração cromática, tanto a ocular quanto a lente objetiva são compostas por grupos de lentes complexos.
2. Microscópio de varredura confocal a laser
O microscópio de varredura confocal a laser parece muito sofisticado e complicado. Na verdade, ele simplesmente usa o laser como fonte de luz de varredura para digitalizar e criar imagens rapidamente de objetos ponto por ponto, linha por linha e superfície por superfície.
Com base no comprimento de onda mais curto do feixe de laser, o feixe em si é muito fino, o que determina que o microscópio confocal de varredura a laser tenha alta resolução, que é cerca de três vezes maior do que um microscópio óptico comum. Este tipo de microscópio é usado para observar a morfologia celular e analisar quantitativamente componentes bioquímicos intracelulares e medir a morfologia celular.
3. Microscópio de campo escuro
Há uma placa de luz no centro do condensador de um microscópio de campo escuro, que evita que a luz de iluminação entre diretamente na lente objetiva. Somente a luz refletida e difratada pela amostra pode entrar na lente objetiva. Portanto, o fundo do campo de visão é preto e as bordas dos objetos são brilhantes.
