Princípios experimentais do método de contagem direta de microscopia microbiana
A contagem direta ao microscópio usando um hemocitômetro é um método comumente usado para contagem de microrganismos. A vantagem deste método é que ele é intuitivo e rápido. Coloque a suspensão bacteriana adequadamente diluída (ou suspensão de esporos) na câmara de contagem entre a lâmina e a lamela do hemocitômetro e conte ao microscópio. Como o volume da câmara de contagem é fixo (00,1 mm2), ele pode ser convertido no número total de microrganismos por unidade de volume com base no número de microrganismos observados ao microscópio. Como este método conta o número total de bactérias vivas e mortas, também é chamado de método de contagem bacteriana total.
Um hemocitômetro geralmente é uma lâmina especial com quatro ranhuras formando três plataformas. A plataforma intermediária é dividida em duas metades por uma pequena ranhura horizontal. Há uma grade quadrada gravada na plataforma de cada lado. Cada grade quadrada é dividida em nove quadrados grandes. O grande quadrado no meio é a sala de contagem. A contagem de microrganismos ocorre na câmara de contagem. A estrutura do hemocitômetro é mostrada na Figura Ⅷ-1.
A escala da câmara de contagem geralmente possui duas especificações. Um é um quadrado grande dividido em 16 quadrados médios, e cada quadrado médio é dividido em 25 quadrados pequenos (Figura Ⅷ-2); o outro é um grande quadrado. A grade quadrada é dividida em 25 quadrados médios, e cada quadrado médio é dividido em 16 quadrados pequenos (Figura VIII-1, C). Mas não importa que tipo de tabuleiro de contagem seja, o número de quadrados pequenos em cada quadrado grande é o mesmo, ou seja, 16×25=400 quadrados pequenos, conforme mostrado na Figura Ⅷ-2.
O comprimento lateral de cada quadrado grande é 1mm, então a área de cada quadrado grande é 1mm2. Depois que a lamela é coberta, a altura entre a lâmina e a lamela é de 0,1 mm, então o volume da câmara de contagem é de 0,1 mm3.
Ao contar, geralmente conte o número total de bactérias em cinco quadrados médios, depois encontre o valor médio de cada quadrado médio e multiplique por 16 ou 25 para obter o número total de bactérias em um quadrado grande e, em seguida, calcule. número total de bactérias em 1ml de solução bacteriana.
