Diferenças entre microscopia de fluorescência e microscopia confocal
Microscópio de fluorescência
1. O microscópio de fluorescência usa luz ultravioleta como fonte de luz para irradiar o objeto que está sendo inspecionado, fazendo com que ele emite fluorescência e depois observe a forma e a posição do objeto sob o microscópio. A microscopia de fluorescência é usada para estudar a absorção, transporte, distribuição e localização de substâncias dentro das células. Algumas substâncias nas células, como a clorofila, podem fluorescer quando expostas à radiação ultravioleta; Existem também algumas substâncias que não podem emitir fluorescência, mas também podem emitir fluorescência se forem coradas com corantes fluorescentes ou anticorpos fluorescentes e irradiados com luz ultravioleta. A microscopia de fluorescência é uma das ferramentas para pesquisas qualitativas e quantitativas sobre essas substâncias.
2. Princípio do microscópio de fluorescência:
(A) Fonte de luz: a fonte de luz emite luz de vários comprimentos de onda (do ultravioleta ao infravermelho).
(B) Fonte de luz do filtro de excitação: transmissão de luz de um comprimento de onda específico que pode causar fluorescência na amostra, enquanto bloqueia a luz inútil para a fluorescência emocionante.
(C) Amostras fluorescentes: geralmente coradas com pigmentos fluorescentes.
(D) Filtro de bloqueio: transmite seletivamente a fluorescência, bloqueando a luz de excitação que não é absorvida pela amostra, e alguns comprimentos de onda na fluorescência também são transmitidos seletivamente. Um microscópio que usa luz ultravioleta como fonte de luz para fazer com que o objeto iluminado emite fluorescência. O microscópio eletrônico foi montado pela primeira vez por Knorr e Haruska em Berlim, Alemanha em 1931. Este microscópio usa vigas de elétrons de alta velocidade em vez de vigas de luz. Devido ao comprimento de onda muito mais curto do fluxo de elétrons em comparação às ondas de luz, a ampliação de um microscópio eletrônico pode atingir 8 0 0000 vezes, com um limite de resolução mínima de nanômetros 0,2. O microscópio eletrônico de varredura, que foi usado pela primeira vez em 1963, permite que as pessoas vejam as pequenas estruturas na superfície dos objetos.
3. Escopo de aplicação: usado para ampliar imagens de pequenos objetos. Geralmente usado para observações de biologia, medicina, partículas microscópicas, etc.
microscópio confocal
1. O microscópio confocal adiciona uma meia lente semi -reflexiva ao caminho de luz refletido, que desvia a luz refletida que passou pela lente em outras direções. No ponto focal, há um defletor com um orifício localizado no ponto focal, e atrás do defletor há um tubo fotomultiplicador. Pode -se imaginar que a luz refletida antes e depois do foco da luz de detecção não pode ser focada no pequeno buraco através deste sistema confocal e será bloqueado pelo defletor. Portanto, o fotômetro mede a intensidade da luz refletida no ponto focal.
2. Princípio: Os microscópios ópticos tradicionais usam fontes de luz do campo, e a imagem de cada ponto na amostra é afetada por difração ou luz dispersa dos pontos vizinhos; O microscópio confocal de varredura a laser usa um feixe de laser para iluminar um orifício e formar uma fonte de luz pontual para digitalizar todos os pontos no plano focal da amostra. O ponto iluminado na amostra é fotografado no poço de detecção e é recebido ponto a ponto ou linha por um tubo fotomultiplicador (PMT) ou um dispositivo de acoplamento frio (CCCD) após detectar o orifício, formando rapidamente uma imagem de fluorescência na tela do monitor de computador. O orifício de iluminação e o pinhão de detecção são conjugados em relação ao plano focal da lente objetiva. Os pontos no plano focal são focados simultaneamente no orifício da iluminação e no orifício de emissão, e os pontos fora do plano focal não serão fotografados no orifício de detecção. A imagem confocal resultante é a seção transversal óptica da amostra, superando a desvantagem das imagens borradas nos microscópios em geral.
