Comparação entre microscópio confocal e microscópio óptico comum
O microscópio é a principal ferramenta para observar células. Dependendo da fonte de luz, pode ser dividido em duas categorias: microscópio óptico e microscópio eletrônico. O primeiro usa luz visível (microscópio ultravioleta para luz ultravioleta) como fonte de luz, enquanto o último usa um feixe de elétrons como fonte de luz. O microscópio óptico comum e o microscópio confocal a laser pertencem ao mesmo microscópio óptico.
I. Microscópio Óptico Geral
O microscópio biológico comum consiste em três partes, a saber: ① sistema de iluminação, incluindo fonte de luz e condensador; ② sistema de ampliação óptica, composto por objetivas e oculares, é o corpo principal do microscópio, para eliminar a aberração esférica e a aberração cromática, as oculares e objetivas são compostas por um grupo complexo de lentes; ③ dispositivo mecânico, utilizado para fixação do material e observação de conveniência.
O objeto do microscópio é claro não apenas determinado pela ampliação, mas também com o poder de resolução do microscópio (resolução), o poder de resolução refere-se ao microscópio (ou o olho humano do alvo 25cm) pode distinguir o objeto zui pequenos intervalos da capacidade de distinguir o tamanho do poder de resolução é determinado pelo comprimento de onda da luz e pela taxa de boca do espelho e pelo índice de refração do meio, expresso na fórmula:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 onde: n=o índice de refração do meio;=o ângulo da boca do espelho (amostra na boca da lente objetiva do ângulo de tensão), NA=taxa de boca do espelho (abertura numérica). O ângulo da boca do espelho deve ser sempre menor que 180°, então o valor zui de sina/2 é necessariamente menor que 1.
O índice de refração do vidro utilizado na produção de lentes ópticas é de 1,65 ~ 1,78, o índice de refração do meio utilizado quanto mais próximo do vidro melhor. Para lentes objetivas secas, o meio para ar, a taxa de boca do espelho é geralmente 0.05 ~ 0,95; lente de óleo com óleo de cedro como meio, a taxa de boca do espelho pode ser próxima de 1,5.
Comprimento de onda de luz comum de 400~700nm, então o valor do poder de resolução do microscópio não será inferior a 0,2μm, o poder de resolução do olho humano é de 0,2mm, então o design geral da ampliação zui do microscópio geralmente é 1000X.
Em segundo lugar, microscópio de varredura confocal a laser
Microscópio de varredura confocal a laser (microscópio de varredura confocal a laser), com um laser como fonte de luz de varredura, ponto por ponto, linha por linha, superfície por superfície, imagem de varredura rápida, varredura a laser e coleta de fluorescência de uma objetiva comum, ponto de foco a laser de varredura objetiva , mas também imagem instantânea do ponto do objeto. Devido ao comprimento de onda mais curto do feixe de laser, o feixe é muito fino, de modo que o microscópio confocal de varredura a laser tem uma alta resolução, cerca de 3 vezes a de um microscópio óptico comum. O sistema é focado uma vez e a varredura é limitada a um plano da amostra. Quando a profundidade de focagem não é a mesma, podem ser obtidas imagens de diferentes níveis de profundidade da amostra, e essas informações da imagem são armazenadas no computador, por meio de análise e simulação computacional, pode-se mostrar a estrutura tridimensional da amostra celular .
