Por que você precisa usar um microscópio confocal?
1. Os microscópios ópticos atingiram um estado de perfeição através dos esforços e melhorias dos nossos grandes antecessores. Na verdade, os microscópios comuns podem nos fornecer belas imagens microscópicas de forma simples e rápida. No entanto, ocorreu um evento que trouxe inovação revolucionária a este mundo quase perfeito da microscopia. Esta foi a invenção do "microscópio confocal de varredura a laser". A característica deste novo tipo de microscópio é que utiliza um sistema óptico que extrai a informação da imagem apenas na superfície onde o foco está focado, e restaura a informação obtida na memória da imagem enquanto muda o foco, obtendo assim informação 3D completa. Uma imagem vívida de inteligência. Através deste método, podem ser facilmente obtidas informações sobre o formato da superfície que não podem ser confirmadas com um microscópio normal. Além disso, para microscópios ópticos comuns, "aumentar a resolução" e "aprofundar a profundidade de foco" são condições conflitantes, especialmente em grandes ampliações. Porém, na microscopia confocal, esse problema é facilmente resolvido.
2. Vantagens do sistema óptico confocal
O sistema óptico confocal realiza iluminação pontual na amostra, e a luz refletida também utiliza um receptor pontual para receber a luz. Quando a amostra é colocada na posição de foco, quase toda a luz refletida pode atingir o fotorreceptor. Quando a amostra está fora de foco, a luz refletida não consegue atingir o fotorreceptor. Ou seja, no sistema óptico confocal, apenas a imagem que coincide com o foco será emitida, e os pontos de luz e a luz espalhada inútil serão blindados.
3. Por que usar laser?
No sistema óptico confocal, a amostra é iluminada em um ponto, e a luz refletida também é recebida por meio de um fotorreceptor pontual. Portanto, fontes de luz pontuais tornam-se necessárias. Os lasers são fontes de luz muito pontuais. Na maioria dos casos, a fonte de luz dos microscópios confocal utiliza fontes de luz laser. Além disso, as características do laser, como monocromaticidade, diretividade e excelente formato do feixe, também são razões importantes para sua ampla adoção.
4. A observação em tempo real baseada na varredura de alta velocidade torna-se possível
Para a varredura a laser, um defletor óptico acústico (elemento AO) é usado na direção horizontal e um espelho de varredura de feixe servo controlado eletricamente (espelho Servo Galvano) é usado na direção vertical. Como a unidade de deflexão acústico-óptica não possui parte de vibração mecânica, ela pode fazer a varredura em alta velocidade, possibilitando a observação em tempo real na tela de monitoramento. A alta velocidade desse tipo de imagem é um item muito importante que afeta diretamente a velocidade de focagem e recuperação de posição.
5. A relação entre posição de foco e brilho
No sistema óptico confocal, o brilho é máximo quando a amostra é colocada corretamente na posição de foco, e seu brilho diminuirá drasticamente na frente e atrás dela (linha sólida na Figura 4). Esta seletividade sensível do plano focal também é o princípio por trás da determinação da direção da altura e da expansão da profundidade do foco do microscópio confocal. Em contraste, um microscópio óptico normal não apresenta alterações óbvias de brilho antes e depois da posição do foco (linha pontilhada na Figura 4).
6. Alto contraste e alta resolução
Em microscópios ópticos comuns, a luz refletida da parte fora de foco interferirá e se sobreporá à parte de imagem em foco, resultando em uma redução no contraste da imagem. Em contraste, no sistema óptico confocal, a luz dispersa fora do foco e a luz dispersa dentro da lente objetiva são quase completamente removidas, de modo que uma imagem com contraste muito alto pode ser obtida. Além disso, como a luz passa duas vezes pela lente objetiva, a imagem pontual fica mais nítida, o que também melhora o poder de resolução do microscópio.
