O uso correto da microscopia de fluorescência invertida
O microscópio de fluorescência invertida é um microscópio multifuncional usado no campo de pesquisas científicas biológicas de ponta. Sua estrutura é complexa e cara. Portanto, para que os estudantes de graduação em medicina dominem corretamente os padrões de operação e uso do microscópio de fluorescência invertido, os professores precisam primeiro ensinar o conhecimento básico do microscópio de fluorescência invertido antes de demonstrar a operação real do microscópio de fluorescência invertido. Eles devem apresentar a estrutura, princípio, função e métodos básicos de uso do microscópio de fluorescência invertido e, em seguida, demonstrar diferentes funções para diferentes amostras em operações de uso específicas, padronizando gradualmente a operação e o uso do microscópio de fluorescência invertido para estudantes de pós-graduação em medicina.
1. Uso correto da observação visual. Uma das funções de um microscópio de fluorescência invertido é observar em um campo de visão claro. Seu princípio básico é obter imagens em um fundo brilhante com base nas diferentes absorções de luz de cada parte da amostra após ser iluminada pela luz. É principalmente adequado para observar células coradas ou coloridas, fatias de tecido e outras amostras.
2. Uso correto da observação diferencial. A segunda função do microscópio de fluorescência invertida é a observação da diferença de fase. Seu princípio básico é converter a diferença do caminho óptico de diferentes partes da amostra em diferença de amplitude e observar através de uma objetiva de diferença de fase com uma placa de fase e um holofote com abertura circular. É principalmente adequado para observar células vivas ou fatias de tecido não coradas. No processo de ensino experimental, além de orientar corretamente os alunos de pós-graduação em medicina a seguir os métodos básicos de operação da observação da diferença de fase, é mais importante orientá-los a compreender e dominar as amostras por meio da observação da diferença de fase. Para eles, o método mais utilizado em futuras pesquisas científicas é a observação microscópica de células cultivadas. Em primeiro lugar, para a seleção do equipamento celular, geralmente é recomendado o uso de pratos de cultura, pratos e garrafas de vidro e materiais plásticos. Eles são em sua maioria incolores e transparentes e podem ser observados diretamente sob um microscópio de fluorescência invertido sem a necessidade de derramar fluido celular ou passar por outros tratamentos. Em segundo lugar, durante a observação microscópica, não abra casualmente a tampa do equipamento para evitar contaminar as células. Finalmente, para os operadores, luvas, máscaras e jalecos brancos devem ser usados não só para proteger a sua própria saúde, mas também para prevenir a contaminação celular.
3. Uso correto da observação de fluorescência. A terceira função de um microscópio de fluorescência invertido é a observação de fluorescência. Seu princípio básico é usar luz de excitação para excitar a amostra e produzir fluorescência, conseguindo assim a observação da forma e do posicionamento da amostra. É principalmente adequado para observar amostras marcadas com fluorescência. A observação de fluorescência é uma função importante da microscopia de fluorescência invertida, com acessórios caros e uso especial. Para que os estudantes de pós-graduação em medicina dominem corretamente as normas operacionais da observação de fluorescência, os professores não apenas lhes ensinam os métodos operacionais básicos, mas, mais importante, ensinam-lhes a singularidade deles. Em primeiro lugar, na preparação da amostra, a superfície da lâmina e da lamela deve ser lisa e a espessura deve ser apropriada (a lâmina deve ter entre 0,8 mm e 1,2 mm, e a lamela deve ter cerca de {{5 }}.17mm); A amostra deve ter espessura adequada, evitando sobreposição de células ou mascaramento de impurezas; O agente selante deve usar uma mistura igual de glicerol e tampão carbonato (0,5mol/L pH 9,0-9,5). Em segundo lugar, antes da observação de fluorescência, as luzes da sala e a luz branca do microscópio de fluorescência invertida devem ser desligadas para garantir que estejam em um ambiente escuro. Finalmente, na observação de fluorescência, o tempo de observação deve ser estritamente controlado, geralmente 1-2 horas por vez, caso contrário a fluorescência decairá e desaparecerá; Ao ajustar a fonte de luz, devem ser usados óculos de proteção para evitar danos UV aos óculos.
4. Uso correto da captura de imagens. Na pesquisa científica, não é apenas necessário que a microscopia de fluorescência invertida possa alcançar múltiplas observações, mas também que a microscopia de fluorescência invertida possa alcançar a captura de imagens. O sistema de microscópio de fluorescência invertida combina um microscópio óptico com um computador por meio de conversão fotoelétrica, permitindo não apenas a observação microscópica na ocular, mas também a observação, edição e armazenamento dinâmico de imagens em tempo real no computador.
