Melhorias na microscopia multifotônica de varredura a laser
O microscópio multifotão de varredura a laser é uma melhoria significativa da microscopia óptica, manifestada principalmente na capacidade de observar estruturas profundas de células vivas, células fixas e tecidos e obter estruturas de planos Z claros e nítidos, ou seja, as estruturas sólidas de planos de várias camadas. O microscópio confocal usa uma fonte de luz a laser, que é expandida para preencher todo o plano focal da lente objetivo e depois convergente em pontos muito pequenos no plano focal da amostra através do sistema de lentes da lente objetivo. De acordo com a abertura numérica da lente objetiva, o diâmetro do ponto de iluminação brilhante é sobre 0. 25-0. 8 μm, e a profundidade é cerca de 0. 5-1. 5 μ m. O tamanho do ponto confocal é determinado pelo design do microscópio, comprimento de onda do laser, características objetivas, configurações de estado da unidade de varredura e propriedades de amostra. A faixa de iluminação e a profundidade de um microscópio de campo são grandes, enquanto a iluminação de um microscópio confocal está focado em um ponto focal no plano focal. A vantagem básica da microscopia confocal é que ela pode executar o corte óptico fino em amostras fluorescentes espessas (até 5 0 μm ou mais), com uma espessura de aproximadamente 0,5 a 1,5 μm. As imagens de fatia óptica em série podem ser obtidas movendo a amostra para cima e para baixo usando um motor de passo do eixo Z do microscópio. A coleta de informações da imagem é controlada dentro de um avião e não será interferida por sinais emitidos de outras posições na amostra. Após remover a influência da fluorescência de fundo e aumentar a relação sinal / ruído, o contraste e a resolução das imagens confocais são significativamente melhoradas em comparação com as imagens de fluorescência de iluminação de campo tradicionais. Em muitas amostras, componentes estruturais complexos se entrelaçam para formar sistemas complexos, mas uma vez que seções ópticas suficientes podem ser coletadas, podemos usar o software para reconstruí -los em três dimensões. Esse método experimental tem sido amplamente utilizado na pesquisa biológica para elucidar as complexas relações estruturais e funcionais entre células ou tecidos.
