Princípio de funcionamento do microscópio confocal a laser
A microscopia confocal a laser é baseada em imagens de microscópio de fluorescência com a adição de um dispositivo de varredura a laser, o uso de processamento de imagem de computador, a resolução da imagem óptica aumentada em 30% - 40%, o uso de excitação de luz ultravioleta ou visível de fluorescente Sondas, de modo a obter a imagem de fluorescência da microestrutura interna de células ou tecidos, em nível subcelular para observar sinais fisiológicos e alterações na morfologia celular, como Ca2+, PH, potencial de membrana, etc., tornou-se uma nova geração de poderosas ferramentas de pesquisa em morfologia, biologia molecular, neurociência, farmacologia, genética e outros campos. O sistema de imagem confocal a laser é uma nova geração poderosa de ferramentas de pesquisa nas áreas de morfologia, biologia molecular, neurociência, farmacologia, genética e assim por diante. O sistema de imagem confocal a laser pode ser usado para observar uma variedade de tecidos e células corados, não corados e marcados com fluorescência, etc., para observar e estudar o crescimento e desenvolvimento de seções de tecido e células in vivo, e para estudar e medir intracelular transporte de substâncias e conversão de energia. É capaz de realizar o estudo de alterações de íons e PH em células vivas (RATIO), pesquisa de neurotransmissores, interferência diferencial e tomografia de fluorescência, tomografia de fluorescência múltipla e sobreposição, análise de espectroscopia de fluorescência de indicadores de fluorescência de análise quantitativa de amostras de fluorescência de tempo- varredura retardada e componentes dinâmicos da estrutura dinâmica tridimensional de tecidos e células, análise da transferência de energia de ressonância de fluorescência, pesquisa de hibridização in-situ de fluorescência (FISH), pesquisa do citoesqueleto (FISH) e estudo do citoesqueleto. FISH), pesquisa de citoesqueleto, pesquisa de localização genética, análise de produtos de PCR em tempo real in situ, pesquisa de recuperação de branqueamento fluorescente (FRAP), pesquisa de comunicação intercelular, pesquisa interproteína, pesquisa sobre potencial de membrana e fluidez de membrana, etc., para completar o análise de análise de imagens e reconstrução tridimensional e outras análises.
Áreas de aplicação do sistema de microscópio confocal a laser:
Envolvendo medicina, pesquisa científica animal e vegetal, bioquímica, **ologia, biologia celular, embrião de tecidos, ciência alimentar, genética, farmacologia, fisiologia, óptica, patologia, botânica, neurociência, biologia marinha, ciência dos materiais, ciência eletrônica, mecânica, petróleo geologia, mineralogia.
Princípios básicos
O microscópio óptico tradicional utiliza uma fonte de luz de campo, a imagem de cada ponto da amostra sofrerá interferência da difração ou dispersão da luz dos pontos vizinhos; o microscópio confocal a laser usa um feixe de laser através do orifício de iluminação para formar uma fonte de luz pontual para escanear cada ponto no plano focal da amostra, o ponto irradiado na amostra será visualizado no orifício de detecção e, em seguida, será recebido pelo furo de detecção após o tubo multiplicador de pontos (PMT) ou o dispositivo de eletroacoplamento frio (cCCD), ponto por ponto ou linha por linha, e então ser rapidamente exibido no monitor do computador. Recebida ponto por ponto ou linha por linha pelo PMT ou cCCD atrás do orifício da sonda, a imagem fluorescente é rapidamente formada na tela do monitor do computador. O pinhole de iluminação e o pinhole de detecção são conjugados em relação ao plano focal da lente objetiva, os pontos no plano focal são focados no pinhole de iluminação e no pinhole de emissão ao mesmo tempo, e os pontos fora do plano focal não serão ser visualizado no orifício de detecção, de modo que a imagem confocal obtida seja uma seção transversal óptica da amostra, o que supera a desvantagem do desfoque da imagem do microscópio comum.
