Por que a ampliação da lente de óleo é maior do que a da lente objetiva comum?
Razões pelas quais as bactérias precisam ser fixadas antes da coloração em experimentos microbiológicos:
1: Mata as células, é fácil de manchar com corante.
2: Faça as bactérias aderirem à lâmina de vidro, e não é fácil ser lavada pela água.
Ao fixar, deve ser seco lentamente. Se você realmente quiser acelerar, pode secá-lo algumas vezes ao longe, acima da chama da lamparina a álcool. Não deixe a lâmina de vidro esquentar, senão ela pode destruir a forma de vida das bactérias.
Coloração de Gram e observação microscópica de bactérias
1. Princípio experimental
Princípio da coloração de Gram: As bactérias respondem de maneira diferente à coloração de Gram devido à composição e estrutura de suas paredes celulares. A parede celular de bactérias Gram-positivas é principalmente um nó de rede formado por peptidoglicano. Quando tratado com etanol, o tamanho dos poros da estrutura da rede torna-se menor devido à desidratação e a permeabilidade diminui, de modo que o complexo de cristal violeta-iodo A substância não é fácil de ser eluída e retida na célula, e o azul- a cor púrpura do agente de coloração primário ainda é mantida após a descoloração e a contracoloração. A camada de peptidoglicano da parede celular de bactérias Gram-negativas é fina e o teor de lipídios é alto, então quando o tratamento de descoloração é realizado, o lipídio é dissolvido por etanol (ou acetona), e a permeabilidade da parede celular aumenta, então que o complexo de cristal violeta-iodo é mais fácil de ser eluído e, após a contracoloração, as células são coradas com a cor vermelha da contracoloração. Princípio de imagem do microscópio: Os microscópios ópticos comuns modernos usam dois sistemas de lentes de ocular e lente objetiva para ampliar a imagem, por isso são freqüentemente chamados de microscópios compostos. No sistema óptico do microscópio, o desempenho da lente objetiva é o mais crítico, e a ampliação da lente de óleo é a maior, que é a mais importante para a pesquisa microbiológica. O principal objetivo de adicionar óleo de imersão entre a lâmina de vidro e a lente é aumentar o brilho da iluminação e aumentar a resolução do microscópio. O óleo é usado em vez do ar como meio de transmissão de luz para reduzir a refração ou reflexão total da luz e tornar a imagem observada mais clara.
2. Equipamento experimental
1. Colônias:
Cultura inclinada de ágar nutriente de Escherichia coli 24h,
Staphylococcus aureus cerca de 24h de cultura inclinada de ágar-ágar, Bacillus subtilis 12-18h de cultura inclinada de ágar-ágar.
2. Soluções ou reagentes:
Água destilada, solução de iodo, solução corante cristal violeta, álcool 95 por cento, solução corante safranina, óleo de cedro. 3. Instrumento:
Microscópio, lâmina de vidro, alça de inoculação, lâmpada de álcool, pinças, tecido para lentes.
3. Etapas experimentais
a:
1. Esfregar
Retire a lâmina, acenda a lâmina, queime o álcool na lâmina e esterilize-a, coloque uma pequena gota de água destilada no meio, use o loop de inoculação para pegar suavemente uma pequena quantidade de bactérias no meio inclinado do teste tubo, Durante todo o processo, a boca do tubo de ensaio deve estar acima da lâmpada de álcool, e a velocidade deve ser rápida para evitar a contaminação do meio de cultura. Em seguida, espalhe as pequenas gotas de água na lâmina de vidro em movimentos circulares, pare quando as gotas de água estiverem turvas e espere que sequem e fixem.
2. Tingimento primário
Pingar cristal violeta (é apropriado cobrir apenas o filme bacteriano) sobre a colônia, corar por 1-2 minutos, despejar a solução de coloração e enxaguar com água fina a partir do topo da lâmina até que o eluato fique incolor. e coloque a mancha na lâmina. Sacuda a água das fatias.
3. Mordente
Adicione a solução de iodo gota a gota para remover a água residual, cubra por cerca de 1 minuto e lave com água.
4. Descoloração
Agite a água na lâmina de vidro, incline a lâmina de vidro e adicione álcool 95% para descolorir sob o fundo branco, até que o álcool que sai não pareça azul, enxágue imediatamente o álcool com água e coloque a lâmina de vidro Agite da água nas fatias.
5. Contracoloração
Contraste com solução de safranina por cerca de 1-2 minutos, lave com água e depois seque com papel absorvente
6. Exame microscópico:
Procure a colônia bacteriana a ser observada sob a lente de baixa ampliação (continue movendo o slide, se sentir uma sombra vermelha, pare imediatamente, ajuste a ampliação, se não for uma colônia, continue a encontrar), levante o barril da lente, e depois mude para o espelho de óleo. Adicione uma gota de óleo de cedro na área da amostra e abaixe cuidadosamente o corpo da lente com o ajustador grosso para que a lente de óleo fique imersa no óleo e quase toque na amostra. Levante o condensador para a posição mais alta e abra totalmente a abertura, use o ajustador grosso para levantar o barril da lente lentamente até que a imagem do objeto apareça no campo de visão e use o ajuste fino para torná-lo claro e focado.
