Quais especificações de amostra são necessárias para microscopia de luz?
No processo de preparação da amostra do microscópio óptico, a espessura do corte da amostra está entre 2-25um; a espessura da fatia do microscópio eletrônico está dentro de 50-100nm (exceto para o microscópio eletrônico de alta tensão, cuja espessura da amostra pode chegar a 1um), então o método da fatia usado não é o mesmo.
Em termos de suporte, o suporte da seção do microscópio óptico é uma lâmina de vidro, enquanto o suporte da seção do microscópio eletrônico é uma grade.
Em termos de fixação, as fatias do microscópio óptico são fixadas com um fixador composto, enquanto as fatias do microscópio eletrônico são fixadas repetidamente com um único fixador.
Em termos de coloração, a coloração de amostras ópticas é relativamente simples. De acordo com diferentes amostras de observação e tipos de microscópios ópticos, geralmente é suficiente corar com alguns agentes de coloração fixos. Existem muitos e complicados métodos para recolorir amostras de microscópio eletrônico, como coloração negativa, coloração de prata e assim por diante.
Em termos de inclusão, parafina, colódio, gelatina, etc. são usados como agentes de inclusão para seções de microscópio óptico; resina epóxi, resina de poliestireno, resina de isobutileno e resina solúvel em água são usadas como agentes de incorporação para seções de microscópio eletrônico.
Para garantir que o campo de visão do microscópio possa ser uniforme e totalmente iluminado, o sistema óptico de iluminação deve ser ajustado quando o microscópio for instalado e depurado pela primeira vez. Este é um meio importante e a forma mais básica de usar o microscópio corretamente e obter resultados corretos e confiáveis. requisitos. Além disso, dominar corretamente o ajuste do sistema de caminho óptico de iluminação é uma etapa necessária após a substituição da lâmpada da fonte de luz durante o uso do microscópio, e também é um meio necessário para verificar o desempenho do microscópio de tempos em tempos durante o dia a dia usar. O ajuste do sistema de caminho óptico de iluminação do microscópio inclui principalmente os quatro itens a seguir: 1. Ajuste preliminar da câmara da lâmpada da fonte de luz fora do microscópio ① Abra primeiro o invólucro da câmara da lâmpada, pressione o clipe de mola para colocar a lâmpada de halogênio no soquete e evite o contato direto com a lâmpada com os dedos durante a instalação (pode ser separado por um pano macio ou papel) para evitar impressões digitais e outras sujeiras na lâmpada, o que afetará a vida útil da lâmpada. ②Coloque a lâmpada sobre a mesa, após ligar a energia, use uma chave de fenda especial para ajustar o orifício do botão de foco da lâmpada (marcado com "←→"), para que o filamento seja projetado na parede 1-2 m de distância e a imagem do filamento é ajustada. Em seguida, ajuste a altura da lâmpada e ajuste o orifício da rosca (marcado com "──") para tornar a posição do filamento adequada; em seguida, ajuste a posição esquerda e direita da lâmpada para ajustar o orifício do parafuso (marcado com "──") para tornar a posição esquerda e direita do filamento apropriada.
2. O objetivo de verificar e corrigir a posição do iluminante da fonte de luz (filamento) no microscópio é ajustar a extremidade da imagem do iluminante diretamente no campo de visão da lente objetiva e garantir que o campo de visão de o microscópio é totalmente e uniformemente iluminado a partir da perspectiva da fonte de luz. Iluminação, que é um pré-requisito para ajustar o sistema de iluminação Kuhler. Ferramentas básicas necessárias: O telescópio de centragem é equipado quando o microscópio é adquirido. ① Desconecte a luva de vidro fosco no compartimento da lâmpada e coloque o compartimento da lâmpada de volta no microscópio. ② Escolha uma lente objetiva de 10×, ligue o programa da fonte de luz para encontrar a amostra e focá-la com clareza e, em seguida, use uma lente objetiva de 40× para focar a amostra com clareza (lente objetiva de 40× Você pode ver toda a imagem do filamento ); ③ Abra o diafragma de abertura e o diafragma de campo do condensador ao máximo; ④ Desconecte uma das oculares, substitua por um telescópio centralizador, segure a parte branca, estique a ocular preta com a outra mão, você pode ver a imagem do filamento no campo de visão; ⑤ Se a posição do filamento não for adequada, ajuste o orifício "──" para ajustar a imagem do filamento na direção horizontal e ajuste o orifício "──" para ajustar a imagem do filamento na direção vertical até Ajustar a imagem do filamento à imagem circular leve que apenas preenche a abertura da objetiva; ⑥ Após o ajuste, insira a luva de vidro fosco de volta à posição original, desconecte o telescópio centralizador e recoloque a ocular para o próximo ajuste. O ajuste acima mencionado da câmara da lâmpada da fonte de luz de iluminação fora do microscópio e a verificação da posição do corpo luminoso da fonte de luz dentro do microscópio só precisam ser realizados quando o microscópio é instalado e depurado pela primeira vez e quando a lâmpada é substituída , e o microscópio não pode ser ajustado aleatoriamente ao usar o microscópio. Em caso de confusão, pode ser ajustado de volta ao estado original de acordo com as etapas acima.
3. Ajuste correto do sistema de iluminação Kohler Uma das principais tarefas do ajuste correto do microscópio é o ajuste do sistema de caminho óptico de iluminação, e a chave é o ajuste do sistema de iluminação Kohler. Para cada pessoa que usa um microscópio, especialmente aqueles que fazem fotomicrografias, eles devem ter uma certa compreensão e domínio do princípio do sistema de iluminação Kuhler e suas etapas de ajuste, a fim de dar pleno desempenho às funções do microscópio e tirar fotos. As fotos que saem podem ser mais consistentes e com efeito perfeito. O princípio do sistema de iluminação Kohler é simples: a luz emitida por qualquer ponto da fonte de luz iluminante pode iluminar o campo de visão do microscópio, e a luz emitida por cada ponto da fonte de luz iluminante é coletada e no campo de visão do microscópio Obtém-se uma iluminação muito completa e uniforme. O objetivo de ajustar o sistema de iluminação Kuhler é obter iluminação uniforme e suficiente para o campo de visão observado e evitar que a luz difusa afete ou interfira no sistema de imagem, de modo a evitar o embaçamento do filme durante a fotografia. Componentes necessários para um sistema de iluminação Kohler de alto ajuste: diafragma de campo, sistema de lentes condensadoras que podem ser ajustadas no eixo. ① Selecione a lente objetiva 10× e a ocular 10× ② Coloque a lente frontal do condensador no caminho óptico, ajuste o diafragma de abertura para uma posição moderada (nem muito grande nem pequena) e, em seguida, levante o condensador até o posição superior e ajuste a plataforma giratória do condensador para a posição "J" do campo claro ③ Ajuste o diafragma de campo para o mínimo (0,1)
④ Coloque a amostra biológica selada no palco, ligue a fonte de luz e foque claramente
⑤ Haverá uma área parcialmente iluminada ou ponto brilhante no campo de visão, que é a imagem borrada do diafragma de campo, na qual os detalhes da amostra podem ser vistos claramente; fora dele há um campo de visão mais escuro, que pode não necessariamente ver os detalhes da amostra com clareza
⑥Ajuste ligeiramente o condensador para baixo, para que o ponto brilhante no campo de visão diminua gradualmente e gradualmente se torne uma imagem poligonal clara, que é a imagem clara do diafragma de campo;
⑦Geralmente, a imagem poligonal não está no centro do campo de visão, sendo necessário ajustar um par de parafusos de centralização do condensador para ajustar a imagem poligonal do diafragma de campo para a posição central;
⑧Abra gradualmente o diafragma do campo de visão para tornar a imagem do polígono um polígono inscrito do campo de visão e verifique ainda mais o status do alinhamento. Se o alinhamento não for o ideal, continue a ajustar o parafuso de alinhamento;
⑨Abra levemente o diafragma do campo de visão, de modo que sua imagem poligonal simplesmente desapareça na borda do campo de visão. Até agora, o ajuste do sistema de iluminação Kohler está concluído. Depois que o sistema de iluminação Kohler é ajustado, todo o campo de visão é iluminado uniformemente e as micrografias tiradas são brilhantes e claras com contraste normal.
