Existem dois tipos de microscópios de fluorescência com base em seus caminhos de luz.
1. Microscópio de fluorescência de transmissão: A fonte de luz de excitação passa através do material da amostra através de um condensador para excitar a fluorescência. Um coletor de campo escuro é comumente usado, ou um coletor comum pode ser usado, e o refletor é ajustado para desviar e irradiar lateralmente a luz de excitação para a amostra. Este é um microscópio de fluorescência mais antigo. A vantagem é que a fluorescência é forte em baixa ampliação, mas a desvantagem é que a fluorescência enfraquece à medida que a ampliação aumenta. Portanto, é melhor observar materiais de amostra maiores.
2. O microscópio de epifluorescência é um novo tipo de microscópio de fluorescência desenvolvido nos tempos modernos. A diferença do anterior é que a luz de excitação cai da lente objetiva para a superfície da amostra, ou seja, a mesma lente objetiva é usada como condensador de iluminação e lente objetiva para coletar fluorescência. Um divisor de feixe de duas cores precisa ser adicionado ao caminho óptico, que é 45% com o urânio óptico. Ângulo, a luz de excitação é refletida na lente objetiva e concentrada na amostra. A fluorescência gerada pela amostra e a luz de excitação refletida pela superfície da lente objetiva e pela superfície do vidro de cobertura entram na lente objetiva ao mesmo tempo e retornam ao divisor de feixe dicromático, de modo que a luz de excitação separada da fluorescência, a excitação residual a luz é então absorvida pelo filtro de bloqueio. Se você usar diferentes inserções de combinação de filtro de excitação/divisor de feixe de duas cores/filtro de bloqueio, poderá atender às necessidades de diferentes produtos de reação de fluorescência. A vantagem deste tipo de microscópio de fluorescência é que o campo de visão é iluminado uniformemente, a imagem é nítida e quanto maior a ampliação, mais forte será a fluorescência.
(2) Como usar o microscópio de fluorescência.
1. Ligue a fonte de luz e a lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão precisa aquecer por vários minutos para atingir seu ponto mais brilhante.
2. Os microscópios de fluorescência de transmissão exigem que o filtro de excitação necessário seja instalado entre a fonte de luz e o condensador, e que o filtro de bloqueio correspondente seja instalado atrás da lente objetiva. Os microscópios de epifluorescência precisam inserir o filtro de excitação/divisor de feixe de duas cores/filtro de bloqueio necessário na ranhura do caminho da luz.
3. Use um microscópio de baixa ampliação para observar e ajuste o centro da fonte de luz de acordo com os dispositivos de ajuste de diferentes modelos de microscópios de fluorescência, de modo que fique localizado no centro de todo o ponto de iluminação.
4. Coloque a amostra e ajuste o foco para observar. Preste atenção durante o uso: Não observe o filtro diretamente com os olhos para evitar danos aos olhos; ao observar a amostra com lentes de óleo, você deve usar lentes de óleo especiais não fluorescentes; a lâmpada de mercúrio de alta pressão não pode ser reaberta imediatamente após ser desligada. Pode ser reiniciado após 5 minutos, caso contrário ficará instável e afetará a vida útil da lâmpada de mercúrio.
(3) Observe sob o microscópio de fluorescência na plataforma de ensino usando um filtro de luz azul-violeta. Pode-se ver que a passagem é o. Nas células coradas com corante fluorescente laranja de acridina a 01%, o núcleo e o citoplasma são excitados para produzir duas cores diferentes de fluorescência (verde escuro e vermelho alaranjado).
