Existem dois tipos de microscópios de fluorescência com base em seu caminho óptico:
1. Microscópio de fluorescência de transmissão: A fonte de luz de excitação é transmitida através do material da amostra através de um condensador para excitar a fluorescência. Coletores de luz de campo escuro comumente usados, ou coletores de luz comuns, podem ser usados para ajustar o refletor para converter a luz de excitação e a luz lateral na amostra. Este é um microscópio de fluorescência relativamente antiquado. Sua vantagem é que a fluorescência é forte em baixa ampliação, enquanto sua desvantagem é que a fluorescência enfraquece à medida que a ampliação aumenta. Portanto, é melhor observar materiais de amostras maiores.
2. Microscópio de fluorescência de feixe descendente Este é um novo tipo de microscópio de fluorescência desenvolvido nos tempos modernos. Ao contrário do anterior, a luz de excitação desce da lente objetiva até a superfície da amostra, usando a mesma lente objetiva do condensador de iluminação e a lente objetiva para coleta de fluorescência. Um separador de feixe de duas cores precisa ser adicionado ao caminho óptico, que forma um ângulo de 45 graus em relação ao urânio leve. A luz de excitação é refletida na lente objetiva e concentrada na amostra. A fluorescência gerada pela amostra, bem como a luz de excitação refletida na superfície da lente objetiva e da lamela, entram na lente objetiva simultaneamente e retornam ao separador de feixe dicróico, separando a excitação e a fluorescência. A excitação residual é então absorvida pelo filtro de bloqueio. Se diferentes filtros de excitação/separadores de feixe de cor dupla/combinações de filtros de bloqueio forem usados, eles poderão atender às necessidades de diferentes produtos de reação fluorescente. A vantagem deste microscópio fluorescente é que a iluminação do campo de visão é uniforme, a imagem é nítida e quanto maior a ampliação, mais forte será a fluorescência.
（2） Uso de microscópio de fluorescência
1. Ligue a fonte de luz e a lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão precisa ser pré-aquecida por alguns minutos para atingir seu pico.
2. O microscópio de fluorescência de transmissão requer que o filtro de excitação necessário seja instalado entre a fonte da lâmpada e o condensador, e o filtro de bloqueio correspondente seja instalado atrás da lente objetiva. O microscópio de fluorescência de feixe descendente precisa inserir o filtro de excitação/separador de feixe de cor dupla/bloco de filtro de bloqueio necessário na ranhura do caminho óptico.
3. Observe com um microscópio de baixa potência e ajuste o centro da fonte de luz de acordo com os dispositivos de ajuste dos diferentes modelos de microscópios de fluorescência, de forma que fique localizado no centro de todo o ponto de iluminação.
4. Coloque as fatias da amostra e foque-as para observar. Durante o uso, deve-se observar que o filtro final não deve ser observado diretamente com os olhos para evitar lesões oculares; Ao observar amostras com um microscópio a óleo, deve ser usado um microscópio especial a óleo não fluorescente; Depois que a lâmpada de mercúrio de alta pressão é desligada, ela não pode ser ligada novamente imediatamente. É necessário levar 5 minutos para reiniciar, caso contrário, ficará instável e afetará a vida útil da lâmpada de mercúrio.
（3） Observando sob um microscópio de fluorescência na plataforma de ensino usando um filtro de luz azul roxo, pode-se observar que as células coradas com 00,01 por cento de corante fluorescente laranja de acridina, o núcleo e o citoplasma são estimulados a produzir dois diferentes cores de fluorescência (verde escuro e vermelho alaranjado).
