A estrutura e os principais componentes de um microscópio de fluorescência
(1) Fonte de luz
Hoje em dia, uma lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão de 200 W é comumente usada como fonte de luz. É feito de vidro de quartzo, com formato esférico no meio e uma certa quantidade de mercúrio preenchido em seu interior. Durante a operação, a descarga entre os dois eletrodos faz com que o mercúrio evapore e a pressão dentro da esfera aumente rapidamente. Quando o mercúrio evapora completamente, ele pode atingir 50-70 pressões atmosféricas padrão, o que geralmente leva cerca de 5-15 minutos. A luminescência das lâmpadas de mercúrio de ultra-alta pressão é o resultado da descarga entre os eletrodos, que se dissocia e reduz continuamente as moléculas de mercúrio e emite fótons. Emite forte luz ultravioleta e azul violeta, suficiente para excitar diversas substâncias fluorescentes, portanto, é amplamente utilizado em microscópios de fluorescência.
As lâmpadas de mercúrio de ultra alta pressão também emitem uma grande quantidade de energia térmica. Portanto, a sala da lâmpada deve ter boas condições de dissipação de calor e a temperatura do ambiente de trabalho não deve ser muito alta.
A nova lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão não requer alta tensão para acender na fase inicial de uso. Após algum tempo de uso, é necessário ligá-lo com alta tensão (cerca de 15000V). Após a partida, a tensão de trabalho é geralmente mantida em 50-60V e a corrente de trabalho é de cerca de 4A. A vida útil média de uma lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão de 200 W é de cerca de 200 horas quando usada por 2 horas de cada vez. Quanto menor o tempo de operação, menor será a vida útil. Se operado por apenas 20 minutos uma vez, a vida útil é reduzida em 50%. Portanto, tente minimizar o número de partidas durante o uso. A eficiência luminosa de uma lâmpada diminui gradualmente durante o uso. Depois que a luz se apaga, é necessário aguardar o resfriamento antes de reiniciar. Após acender a lâmpada, ela não deve ser desligada imediatamente para evitar evaporação incompleta do mercúrio e danos ao eletrodo. Geralmente, é necessário esperar 15 minutos. Devido à alta pressão e forte radiação ultravioleta da lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão, a lâmpada deve ser colocada na câmara da lâmpada antes de ser acesa para evitar lesões oculares e explosão durante a operação.
O circuito de uma fonte de luz de lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão (100W ou 200W) e seus componentes, incluindo transformação de tensão, supressão de corrente e inicialização. Existe um sistema de ajuste do centro de luz da lâmpada na sala da lâmpada, com um refletor côncavo banhado em alumínio instalado atrás da lâmpada e uma lente coletora de luz instalada na frente.
A lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão produzida internamente GCQ-200 tem bom desempenho e pode substituir lâmpadas importadas como HBO-200, com vida útil média de mais de 200 horas e preço relativamente baixo.
Um dispositivo simples e portátil de fonte de luz fluorescente de bromo e tungstênio de alta temperatura de cor desenvolvido na China, com pequeno volume, peso leve, baixo consumo de energia, uso duplo de CA e CC (com fonte de alimentação CC integrada), fácil de transportar, fácil de usar , foi promovido e aplicado.
(2) Sistema de filtragem de cores
O sistema de filtro colorido é uma parte importante de um microscópio de fluorescência, consistindo em uma placa de filtro de excitação e uma placa de filtro de compressão. O modelo da placa do filtro costuma ser inconsistente entre os fabricantes. As placas de filtro geralmente recebem o nome do tom da cor básica, com a primeira letra representando o tom da cor, a segunda letra representando o vidro e o número representando as características do modelo. Microscópio Olympus
(3) Lente objetiva
Várias lentes objetivas podem ser aplicadas, mas o uso de lentes objetivas acromáticas é adequado para fluorescência devido ao seu desempenho de autofluorescência e transmitância extremamente baixo (faixa de comprimento de onda). Devido ao fato de que o brilho fluorescente da imagem no campo de visão do microscópio é diretamente proporcional ao quadrado da razão de abertura da lente objetiva e inversamente proporcional à sua ampliação, a fim de melhorar o brilho da imagem fluorescente, uma lente objetiva com uma taxa de abertura maior deve ser usado. Especialmente em grandes ampliações, o seu impacto é muito significativo. Portanto, para amostras com fluorescência insuficiente, deve-se utilizar uma lente objetiva com alta taxa de abertura, combinada com uma ocular o mais baixa possível (4 x, 5 x, 6,3 x, etc.).
(4) Espelho reflexivo
A camada reflexiva de um refletor é geralmente revestida de alumínio porque o alumínio absorve menos luz ultravioleta e visível na região azul roxa, com uma reflexão superior a 90%, enquanto a prata reflete apenas 70%; Geralmente, são usados refletores planos.
(5) Espelho refletor
O concentrador projetado e fabricado especificamente para microscopia de fluorescência é feito de vidro de quartzo ou outro vidro que transmita luz ultravioleta. Existem dois tipos de observadores de campo escuro com campo de visão distinto. Existe também um concentrador de fluorescência diferencial.
(6) Dispositivo de luz descendente
O novo tipo de dispositivo de luz incidente reflete as partes de comprimento de onda mais curto (ultravioleta e azul púrpura) da fonte de luz para o filtro do espectrofotômetro de interferência devido às propriedades do revestimento do filtro. Quando o filtro está voltado para a fonte de luz em um ângulo de 45 graus. Quando inclinado, ele é direcionado verticalmente em direção à lente objetiva e direcionado à amostra através da lente objetiva, fazendo com que a amostra fique excitada. Neste ponto, a lente objetiva atua diretamente como um condensador. Ao mesmo tempo, as partes longas do filtro (verde, amarelo, vermelho, etc.) são transparentes para o filtro, portanto não refletem na direção da objetiva. O filtro atua como uma placa de filtro de excitação e, como a fluorescência da amostra está na região de comprimento de onda longo da luz visível, ela pode ser observada através do filtro e atingir a objetiva. O brilho da imagem fluorescente aumenta com a ampliação e é mais forte do que a fonte de luz transmitida em alta ampliação. Além de sua função como fonte de luz transmissiva, é mais adequado para observação direta de amostras opacas e semitransparentes, como placas espessas, membranas de filtro, colônias, amostras de cultura de tecidos, etc. use dispositivos de luz descendente, conhecidos como microscópios de fluorescência de luz descendente.
