O papel de cada filtro na microscopia de fluorescência
A questão mais crucial da microscopia de fluorescência é a combinação de filtros, e tanto o filtro de excitação quanto o filtro de proteção devem ser adequados para o corpo fluorescente observado e combinados entre si. Para determinados fins específicos, se houver um erro na seleção de um filtro, isso poderá levar a mal-entendidos e até mesmo a resultados incorretos. As conquistas da tecnologia de microscopia de fluorescência e o uso de filtros de alta qualidade e grupos de filtros engenhosos são inseparáveis. Existem vários tipos de filtros para microscopia de fluorescência.
1. Filtro absorvente de calor
O filtro de absorção de calor é um filtro necessário para evitar que a radiação térmica no espectro da fonte de luz danifique o grupo de dispositivos ópticos. Os primeiros microscópios avançados eram equipados com garrafas em forma de tambor que podiam conter água destilada como dispositivos de absorção de calor. Os microscópios modernos de pesquisa em grande escala são equipados com filtros de vidro que absorvem calor em caixas ou câmaras de luz de fontes de luz, que são folhas de vidro transparentes levemente amareladas. Os filtros KG1 (2 mm) e BG38 (4 mm) da Leitz podem transmitir quase todos os espectros de luz ultravioleta e visível, tornando-os filtros com fluxo luminoso de até 98%. Absorve seletivamente apenas linhas de radiação fototérmica infravermelha.
2. Filtro de excitação
Os filtros de excitação podem absorver seletivamente linhas espectrais de comprimento de onda longo e transmitir apenas luz ultravioleta. Filtros para luz roxa, azul e verde são filtros de excitação. Zeiss, Reichert, Olympus série B, série G, série BG, série Shott UG, Opton H, G, série BP, série Leitz BP e outros filtros são todos filtros de excitação.
3. Filtro de bloqueio
O filtro de bloqueio é um filtro que absorve seletivamente linhas espectrais de comprimento de onda curto e radiação infravermelha, permitindo ao observador ver a fluorescência emitida pelo objeto sendo testado enquanto protege a córnea dos danos UV.
4. Filtro de separação de luz colorida
O filtro de separação de luz colorida é um filtro que reflete a luz de excitação no objeto que está sendo testado, fazendo com que o objeto emita fluorescência e, em seguida, transmite a fluorescência para a ocular. Este tipo de filtro só pode ser usado em concentradores de feixe descendente, enquanto a microscopia de fluorescência de luz de transmissão não requer separação de cores.
5. Filtro de interferência
O filtro de interferência é um tipo de filtro de excitação de alto desempenho. É um filtro feito empilhando vários filmes finos de metal entre duas folhas de vidro polido. O índice de refração de cada filme de metal fino é diferente, de modo que as linhas espectrais de diferentes comprimentos de onda da fonte de luz de iluminação são repetidamente refletidas em cada filme de metal, fazendo com que alguns comprimentos de onda das linhas espectrais sejam cancelados devido à interferência destrutiva, enquanto outros são fortalecidos por interferência aditiva e transmitida através. Isso resulta em um filtro com um espectro de transmissão estreito, largura de meio pico de apenas 6 ~ 20 nm e uma transmitância de 60% ~ 70%.
