Os princípios da microscopia de fluorescência e microscopia confocal a laser
microscópio de fluorescência
1. Um microscópio de fluorescência é um dispositivo que usa luz ultravioleta como fonte de luz para iluminar o objeto que está sendo testado, fazendo com que ele emita fluorescência, e então observar a forma e a localização do objeto sob o microscópio. A microscopia de fluorescência é usada para estudar a absorção, transporte, distribuição e localização de substâncias intracelulares. Algumas substâncias nas células, como a clorofila, podem emitir fluorescência após serem expostas à radiação ultravioleta; Embora algumas substâncias por si só não possam emitir fluorescência, elas também podem emitir fluorescência após serem coradas com corantes fluorescentes ou anticorpos fluorescentes e irradiadas com luz ultravioleta. A microscopia de fluorescência é uma das ferramentas para pesquisas qualitativas e quantitativas sobre essas substâncias.
2. Princípio do microscópio de fluorescência:
(A) Fonte de luz: A fonte de luz emite luz de vários comprimentos de onda (do ultravioleta ao infravermelho).
(B) Fonte de luz do filtro de excitação: Transmite luz de um comprimento de onda específico que pode produzir fluorescência na amostra, enquanto bloqueia a luz que é inútil para a fluorescência de excitação.
(C) Amostra fluorescente: Geralmente corada com pigmento fluorescente.
(D) Filtro de bloqueio: transmite seletivamente a fluorescência bloqueando a excitação que não foi absorvida pela amostra, e alguns comprimentos de onda também são transmitidos seletivamente na fluorescência. Um microscópio que usa luz ultravioleta como fonte de luz para emitir fluorescência de objetos irradiados. O microscópio eletrônico foi montado pela primeira vez por Knorr e Harroska em Berlim, Alemanha, em 1931. Este tipo de microscópio usa feixes de elétrons de alta velocidade em vez de feixes de luz. Devido ao comprimento de onda muito mais curto do fluxo de elétrons em comparação com as ondas de luz, a ampliação do microscópio eletrônico pode chegar a 800000 vezes, com um limite mínimo de resolução de 0,2 nanômetros. O microscópio eletrônico de varredura, que começou a ser utilizado em 1963, permite que as pessoas vejam as minúsculas estruturas na superfície dos objetos.
3. Escopo de aplicação: Usado para ampliar imagens de pequenos objetos. Geralmente usado para observação de biologia, medicina, partículas microscópicas, etc.
microscópio confocal
1. Um microscópio confocal adiciona uma lente semi-reflexiva ao caminho da luz refletida, que curva a luz refletida que já passou pela lente em outras direções. Há um defletor com um orifício no ponto focal e o pequeno orifício está localizado no ponto focal. Atrás do defletor está um tubo fotomultiplicador. Pode-se imaginar que a luz refletida antes e depois do ponto focal da luz de detecção não pode ser focada no pequeno orifício através deste sistema confocal e será bloqueada pelo defletor. Então o que o fotômetro mede é a intensidade da luz refletida no ponto focal.
2. Princípio: Os microscópios ópticos tradicionais usam uma fonte de luz de campo, e a imagem de cada ponto da amostra é afetada pela difração ou luz espalhada de pontos adjacentes; O microscópio confocal de varredura a laser usa uma fonte de luz pontual formada por um feixe de laser que passa por um orifício iluminado para escanear cada ponto no plano focal da amostra. O ponto iluminado na amostra é fotografado no orifício da sonda e é recebido ponto por ponto ou linha pelo tubo fotomultiplicador (PMT) ou dispositivo de acoplamento termoelétrico (cCCD) após o orifício da sonda, formando rapidamente uma imagem fluorescente na tela do monitor do computador . O orifício de iluminação e o orifício de detecção são conjugados em relação ao plano focal da lente objetiva. Os pontos no plano focal são focados simultaneamente no orifício de iluminação e no orifício de emissão, e os pontos fora do plano focal não são visualizados no orifício de detecção. Isso resulta em uma imagem confocal que é a seção transversal óptica da amostra, superando a desvantagem do desfoque nas imagens microscópicas em geral.
3. Campos de aplicação: envolvendo medicina, pesquisa animal e vegetal, bioquímica, bacteriologia, biologia celular, embriologia de tecidos, ciência alimentar, genética, farmacologia, fisiologia, óptica, patologia, botânica, neurociência, biologia marinha, ciência dos materiais, ciência eletrônica, mecânica , geologia do petróleo e mineralogia.
