O princípio e as características estruturais da microscopia de fluorescência
A microscopia de fluorescência usa um ponto com alta eficiência luminosa para emitir um determinado comprimento de onda de luz (como luz ultravioleta 3650 in ou luz azul violeta 4200 in) através de um sistema de filtragem de cores como luz de excitação e excita as substâncias fluorescentes na amostra para emitir vários cores de fluorescência. Depois disso, é observado através da ampliação da lente objetiva e ocular. Desta forma, é fácil reconhecer mesmo quando a fluorescência é muito fraca contra um fundo forte, com alta sensibilidade. É usado principalmente para o estudo da estrutura e função celular, bem como a composição química. A estrutura básica de um microscópio de fluorescência é composta por um microscópio óptico comum mais acessórios como fonte de luz fluorescente, filtro de excitação, separador de feixe dicróico e filtro de bloqueio. As fontes de luz fluorescente geralmente usam lâmpadas de mercúrio de ultra alta pressão (50-200W), que podem emitir luz de vários comprimentos de onda. No entanto, cada substância fluorescente tem um comprimento de onda de luz de excitação que produz a fluorescência mais forte, então filtros de excitação (tipicamente filtros de excitação ultravioleta, roxo, azul e verde) precisam ser adicionados para permitir que apenas um certo comprimento de onda de luz de excitação penetre e irradie o espécime, enquanto absorve todas as outras luzes. Após ser irradiada pela luz de excitação, cada substância emite uma fluorescência visível maior que o comprimento de onda de irradiação em um tempo muito curto. A fluorescência tem especificidade e geralmente é mais fraca que a luz de excitação. Para observar a fluorescência específica, é necessário adicionar bloqueio (ou supressão) atrás da lente objetiva e usá-lo em combinação.
Diferença entre microscópio de fluorescência e microscópio comum
1. O método de iluminação é geralmente do tipo feixe descendente, no qual a fonte de luz é projetada sobre a amostra através de uma lente objetiva;
2.A fonte de luz é a luz ultravioleta, com um comprimento de onda mais curto e maior resolução do que os microscópios comuns;
3.Existem dois filtros especiais, aquele na frente da fonte de luz é usado para filtrar a luz visível, e aquele entre a ocular e a lente objetiva é usado para filtrar os raios ultravioleta para proteger o olho humano.
A microscopia de fluorescência também é um tipo de microscopia óptica, sendo a principal diferença os diferentes comprimentos de onda de excitação. Isso determina as diferenças na estrutura e no uso entre a microscopia fluorescente e a microscopia óptica comum.
A microscopia de fluorescência é uma ferramenta básica para a citoquímica de imunofluorescência. É composto por componentes principais, como uma fonte de luz, um sistema de placa de filtro e um sistema óptico. Ele usa um determinado comprimento de onda de luz para excitar a amostra para emitir fluorescência e a amplia através de uma lente objetiva e sistema ocular para observar a imagem de fluorescência da amostra.
