Estrutura e componentes principais de um microscópio de fluorescência
(1) Fonte de luz
Hoje em dia, uma lâmpada de mercúrio de ultra{1}}alta pressão de 200 W é comumente usada como fonte de luz. É feito de vidro de quartzo e tem formato esférico no meio, preenchido com uma certa quantidade de mercúrio. Durante a operação, a descarga entre dois eletrodos causa a evaporação do mercúrio e a pressão dentro do bulbo aumenta rapidamente. Quando o mercúrio evapora completamente, ele pode atingir 50-70 pressões atmosféricas padrão, o que geralmente leva de 5 a 15 minutos. A luminescência das lâmpadas de mercúrio de ultra-alta pressão é resultado da descarga entre os eletrodos, que se dissocia continuamente e reduz as moléculas de mercúrio, emitindo fótons de luz. Emite forte luz ultravioleta e azul violeta, suficiente para excitar diversas substâncias fluorescentes, portanto, é amplamente utilizado em microscópios de fluorescência.
(2) Sistema de filtro de cores
O sistema de filtro colorido é uma parte importante de um microscópio de fluorescência, consistindo em uma placa de filtro de excitação e uma placa de filtro de supressão. O modelo da placa de filtro e os nomes dos fabricantes são frequentemente inconsistentes. As placas de filtro geralmente recebem nomes de acordo com os tons básicos das cores, com as letras na frente representando os tons das cores, as letras atrás representando o vidro e os números representando as características do modelo. Microscópio Olympus
(3) Lente objetiva
Todos os tipos de lentes objetivas podem ser usados, mas as lentes acromáticas são adequadas para fluorescência devido à sua autofluorescência extremamente baixa e desempenho de transmissão de luz (faixa de comprimento de onda). Devido ao fato de que o brilho de fluorescência de uma imagem no campo do microscópio é diretamente proporcional ao quadrado da razão de abertura da lente objetiva e inversamente proporcional à sua ampliação, para melhorar o brilho das imagens de fluorescência, uma lente objetiva com uma relação de abertura maior deve ser utilizada. Especialmente em grandes ampliações, o seu impacto é muito significativo. Portanto, para amostras com fluorescência insuficiente, deve-se utilizar uma lente objetiva com alta taxa de abertura, combinada com uma lente ocular tão baixa quanto possível (4 ×, 5 ×, 6,3 ×, etc.).
(4) Espelho reflexivo
A camada reflexiva de um espelho é geralmente revestida com alumínio porque o alumínio absorve menos luz ultravioleta e visível na região azul roxa, com uma taxa de reflexão superior a 90%, enquanto a prata reflete apenas 70%; Geralmente, são usados espelhos planos.
