Habilidades e métodos de uso de microscópio de fluorescência
Parâmetros técnicos do microscópio de fluorescência 1. Ocular grande angular 2. Objetiva acromática 3. Conversor objetivo de quatro furos 4. Dispositivo emissor de fluorescência azul (b) verde (g) sistema de excitação 1 0 lâmpada de mercúrio 0W 5. Coaxial grosso mecanismo de micro-focagem: faixa de foco 15 mm, valor de micro-grade 0,002 mm 6. Faixa móvel longitudinal da bancada mecânica de camada dupla: 70 mm, faixa móvel lateral: 50 mm.
Habilidades e métodos de uso de microscópio de fluorescência
(1) lâminas de vidro
A espessura da lâmina deve estar entre 0.8-1,2 mm e 1,2 mm. Uma lâmina muito espessa não absorverá muita luz, por um lado, e não fará com que a luz de excitação se acumule na amostra, por outro. A lâmina deve ser lisa, de espessura uniforme e isenta de fluorescência espontânea óbvia. Às vezes, são necessárias lâminas de vidro Shi Ying.
(2) Tampa de vidro
A cobertura de vidro tem cerca de 0,17 mm de espessura e é lisa. Para aumentar a luz de excitação, também pode ser utilizada uma lamínula de interferência, que é uma espécie de lamínula especial com várias camadas de substâncias (como fluoreto de magnésio) que apresentam diferentes efeitos de interferência em diferentes comprimentos de onda de luz. Pode fazer a fluorescência passar suavemente e refletir a luz de excitação, e essa luz de excitação refletida pode excitar a amostra.
(3) Espécimes
As secções de tecido ou outras amostras não devem ser demasiado espessas. Se for muito espesso, a maior parte da luz de excitação é consumida na parte inferior da amostra, enquanto a parte superior observada diretamente pela lente objetiva não é totalmente excitada. Além disso, a sobreposição celular ou o mascaramento de impurezas afetam o julgamento.
(4) agente de vedação
O glicerol é comumente usado como agente selante, que deve ser incolor e transparente, sem fluorescência espontânea. O brilho da fluorescência é brilhante em pH 8,5 ~ 9,5 e não é fácil desaparecer rapidamente. Portanto, a mistura equivalente de glicerol e 00,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 tampão de carbonato é frequentemente usada como agente de vedação.
(5) óleo de espelho
Geralmente, o óleo de espelho deve ser usado ao observar amostras com microscópio de fluorescência de campo escuro e espelho de óleo. É melhor usar óleo de espelho especial não fluorescente ou, em vez disso, pode-se usar a glicerina acima. A parafina líquida também pode ser usada, mas o índice de refração é baixo, o que tem um leve impacto na qualidade da imagem.
