Várias notas e dicas para usar a microscopia de contraste de fase
Uso de Microscopia de Contraste de Fase
1) Instale o dispositivo de contraste de fase: remova a lente condensadora do microscópio comum e instale a lente condensadora com um diafragma anular em um microscópio correspondente; remova a lente objetiva comum do microscópio e substitua-a por uma lente objetiva com uma placa de fase; substitua a ocular por oculares de focagem para microscópios de contraste de fase; filtros verdes especiais (às vezes desnecessários) são colocados na entrada de luz da fonte de luz.
2) Alinhamento e foco da luz: Ajuste a ocular de foco e o parafuso de ajuste de espessura até que um círculo branco e um círculo preto possam ser vistos claramente no campo de visão. O círculo preto é fixo e o círculo branco pode ser movido ajustando o parafuso no dispositivo condensador, de modo que o círculo preto e o círculo branco coincidam completamente. Retire a ocular de focagem e substitua-a pela ocular original do microscópio para verificar.
Análise de problemas no uso do microscópio de contraste de fase
1. A influência da espessura da amostra Ao realizar a observação de contraste de fase, a espessura da amostra deve ser de 5 μm ou menos. Ao usar uma amostra mais espessa, a camada superior da amostra é muito clara, mas a camada profunda ficará borrada e causará interferência de mudança de fase. e dispersão de luz.
2. A influência da lamínula e da lâmina de vidro A amostra deve ser coberta com uma lamínula, caso contrário, o anel brilhante do diafragma anular e o anel escuro da placa de fase dificilmente se sobrepõem. A observação de contraste de fase também tem altos requisitos na qualidade do vidro de lâmina e vidro de cobertura. Quando houver arranhões, espessura irregular ou irregularidades, ocorrerá distorção do anel brilhante e interferência de fase. Além disso, quando o slide é muito grosso ou muito fino, o anel brilhante do diafragma anular ficará maior ou menor.
3. Halo e efeito de desvanecimento No processo de imagem do microscópio de contraste de fase, quando uma determinada estrutura fica escura devido ao atraso de fase, não é a perda de luz, mas o resultado da redistribuição da luz no plano da imagem. Portanto, a luz aparentemente perdida em áreas escuras aparecerá como um halo brilhante em torno de objetos mais escuros. Essa é uma desvantagem da microscopia de contraste de fase, que dificulta a observação de estruturas finas, e o fenômeno do halo é mais grave quando o diafragma anular é muito estreito. Outro fenômeno na microscopia de contraste de fase é o efeito de sombreamento, que se refere à perda de contraste nas bordas de uma área maior com o mesmo atraso de fase quando observado por contraste de fase.
4. Inversão de fase Quando n'n, o contraste claro e escuro da imagem é exatamente oposto, o que é chamado de inversão de fase. É irreconhecível quando a diferença de fase δ=0, e o contraste se torna maior com o aumento de δ, e a inversão de fase aparecerá quando δ continuar a aumentar para um determinado valor. Ao usar uma lente objetiva de 90 por cento de alto valor de absorção (alto contraste), este valor de transformação é de cerca de 0.55λ, e ao usar uma lente objetiva de valor de absorção padrão de 70 por cento, é de cerca de 0,33λ . As objetivas com valores de absorbância mais altos devem ser usadas para resolver diferenças de caminho óptico menores.
