Requisitos para a produção de amostras para microscópio de fluorescência
(1) Lâmina de vidro
A espessura do slide deve estar entre 00,8 e 1,2 mm. Se a lâmina for muito espessa, por um lado, absorverá mais luz e, por outro lado, não permitirá que a luz de excitação se acumule na amostra. A lâmina de vidro deve ser lisa, de espessura uniforme e não apresentar fluorescência espontânea óbvia. Às vezes são necessárias lâminas de vidro de quartzo.
(2) Tampa da lâmina de vidro
A espessura da cobertura de vidro é de cerca de 00,17 mm e é lisa. Para aumentar a luz de excitação, também pode ser usado um vidro de cobertura de interferência. Esta é uma cobertura de vidro especialmente projetada com várias camadas de substâncias (como fluoreto de magnésio) que têm diferentes efeitos de interferência na luz de diferentes comprimentos de onda. Pode permitir que a fluorescência passe suavemente, enquanto a luz de excitação por reflexão pode excitar a amostra.
(3) Amostra
Fatias de tecido ou outras amostras não devem ser muito grossas. Se forem muito espessos, a maior parte da luz de excitação é consumida na parte inferior da amostra, enquanto a parte superior observada diretamente pela lente objetiva não é totalmente excitada. Além disso, a sobreposição celular ou o mascaramento de impurezas podem afetar o julgamento.
(4) Agente de vedação
A glicerina é comumente utilizada como agente de montagem, que não deve apresentar fluorescência espontânea, ser incolor e transparente. O brilho da fluorescência é relativamente brilhante em pH 8,5-9,5 e não é fácil de desaparecer rapidamente. Portanto, uma mistura igual de glicerol e 0,5mol/lpH9.0-9,5 tampão de carbonato é comumente usada como agente de montagem.
(5) Óleo de espelho
Ao usar um microscópio de fluorescência de campo escuro e um microscópio de óleo para observar amostras, é necessário usar óleo para lentes. É melhor usar um óleo para lentes não fluorescente especialmente feito, que também pode ser substituído por glicerol, conforme mencionado acima. A parafina líquida também pode ser usada, mas o índice de refração é baixo e tem um leve impacto na qualidade da imagem.
