Prós e contras da microscopia de varredura a laser multifotônica
A microscopia de varredura a laser multifótons é um método experimental baseado na tecnologia de microscópio de varredura a laser, que fornece maior capacidade de corte óptico na observação 3D. O método de excitação de fluorescência multifotônica usa longos comprimentos de onda de luz vermelha ou infravermelha próxima para adquirir imagens fluorescentes de alta resolução de espécimes com morte mínima de espécimes ativos, tornando-o adequado para imagens de células vivas, especialmente tecidos vivos espessos, como fatias cerebrais, embriões, órgãos inteiros e até organismos inteiros.
As vantagens são as seguintes:
1, o uso de luz vermelha ou excitação de luz infravermelha, dispersão de luz é pequena(a dispersão depequenopartículas e o comprimento de onda da quarta potência da razão inversa).
2, não requer um furo, pode coletar mais fótons dispersos da seção transversal de imagem.
3, o pinhole não consegue distinguir entre os fótons dispersos emitidos pela região fora de foco ou área focal, multi-fóton na relação sinal-ruído de imagem profunda é bom.
4, excitação de fóton único de luz ultravioleta ou visível usada no feixe para atingir o plano focal antes que a amostra seja facilmente absorvida e atenuada, não é fácil de excitação profunda.
5, na observação do microscópio biológico, * a primeira consideração é não danificar o estado ativo do próprio organismo, para manter a circulação de água, concentração de íons, oxigênio e nutrientes. Em ocasiões de observação de luz, tanto a energia térmica quanto a de fótons devem permanecer na célula sem prejudicar a quantidade de irradiação, a energia luminosa.
6, o microscópio multifóton também tem muitas vantagens. Tais como resolução tridimensional, intrusão de profundidade, eficiência de espalhamento, luz de fundo, relação sinal-ruído, controle, etc., existem microscópios a laser anteriores que não possuem ou possuem características incomparáveis.
O microscópio confocal de varredura a laser multifóton foi estendido a vários campos de pesquisa e aplicação. É capaz de observação tridimensional não destrutiva de amostras em seu estado natural e pode melhorar a resolução e a relação sinal-ruído do sistema. Usando a mudança das propriedades do material após a excitação multifóton, também é possível obter armazenamento tridimensional de dados de altura e microfabricação tridimensional em qualquer direção, o que tem um alto valor de aplicação. Pode-se acreditar que, com o desenvolvimento de máquinas, materiais, tecnologia laser e outras tecnologias relacionadas à microscopia confocal multifotônica, o microscópio confocal multifotônico de varredura a laser terá maior desenvolvimento e aplicação mais ampla.
As desvantagens são as seguintes:
1, apenas imagens de fluorescência.
2, se a amostra incluir cromóforos que possam absorver a luz de excitação, comopigmentos, a amostrapode ser danificado termicamente.
3, a resolução é ligeiramente reduzida, emborapode ser melhorado pelo uso simultâneo de abertura confocal, mashaverá perda de sinal.
4. O custo da microscopia de varredura multifotônica é alto devido à limitação dos caros lasers ultrarrápidos.
