Preparando e observando amostras biológicas para microscopia eletrônica
A resolução do microscópio depende do comprimento de onda da luz utilizada, o microscópio eletrônico começou a aparecer em 1933 se deve ao uso de um comprimento de onda muito menor que a luz visível do feixe de elétrons como fonte de luz, de modo que a resolução dele pode conseguir do que o microscópio óptico muito melhorado. A diferente fonte de luz também determina uma série de diferenças entre o microscópio eletrônico e o microscópio óptico.
De acordo com as diferenças no princípio de imagem do feixe de elétrons e o papel da amostra nas diferentes formas, o microscópio eletrônico moderno foi desenvolvido para formar vários tipos, atualmente * comumente usado é o microscópio eletrônico de transmissão e o microscópio eletrônico de varredura. microscópio, o primeiro pode estar na faixa de 1,000-1,000,000 vezes a ampliação total da faixa de alterações, o último pode estar na ampliação total do { {4}},000 vezes a ampliação total das alterações entre eles. Este experimento concentra-se na preparação de amostras para os dois tipos de microscópios, microscópio eletrônico de transmissão e microscópio eletrônico de varredura.
Materiais
1. Cepa Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) inclinada.
2. Soluções ou reagentes Acetato de amila, ácido sulfúrico concentrado, etanol anidro, água estéril, solução aquosa de ácido fosfotúngstico sódico a 2% (pH 6.5-8.0), 0,3%. solução de polivinil formaldeído (dissolvido em triclorometano), citocromo c, acetato de amônio, plasmídeo pBR322.
3. Instrumentos ou outros apetrechos Microscópio óptico comum, malha de cobre, funil de porcelana, copo, prato plano, bureta estéril, pinça estéril, lanceta, lâminas, ** placa de contagem, revestidor a vácuo, secador de ponto crítico e assim por diante.
Etapas da operação
(I) Preparação de amostras e observação de microscopia eletrônica de transmissão
1. Tratamento de malha metálica
Amostras para microscopia óptica são colocadas em lâminas para observação. No entanto, na microscopia eletrônica de transmissão, como os elétrons não conseguem penetrar na folha de vidro, apenas o material da malha pode ser usado como transportador, geralmente chamado de malha transportadora. A malha transportadora pode ser dividida em muitas especificações diferentes devido a diferentes materiais e formatos, dos quais o * comumente usado é a malha de cobre 200-400 (número de furos). A malha de cobre deve ser tratada antes do uso para remover a sujeira e mantê-la limpa, caso contrário afetará a qualidade do filme de suporte e a clareza das fotos da amostra. A malha de cobre utilizada neste experimento é de malha 400, que pode ser tratada da seguinte forma: primeiro branquear com acetato de amila por algumas horas, depois enxaguar várias vezes com água destilada e depois branquear em etanol anidro por desidratação. Se a malha de cobre pelo método acima ainda não estiver limpa, pode ser usado para diluir ácido sulfúrico concentrado (1:1) imerso em 1 ~ 2 minutos, ou em solução de NaOH a 1% fervida por vários minutos, enxaguada várias vezes com água destilada , colocado em desidratação com etanol anidro, para ser utilizado.
2. Preparação de filme de apoio
Na observação da amostra, a rede transportadora também deve ser coberta com uma camada de filme uniforme e não estruturado, caso contrário, pequenas amostras vazarão dos orifícios da rede transportadora, essa camada de filme é geralmente chamada de filme de suporte ou filme transportador. O filme de suporte deve ser transparente aos elétrons e sua espessura geralmente deve ser inferior a 20 nm; sob o impacto do feixe de elétrons, o filme também deve ter um certo grau de resistência mecânica, poder manter a estabilidade da estrutura e ter boa condutividade térmica; além disso, a rede de suporte não deve ter estrutura visível ao microscópio eletrônico, não apresentar reação química com a amostra transportada e não interferir na observação da amostra, e sua espessura é geralmente de cerca de 15 nm. O filme de suporte pode ser feito de filme plástico (por exemplo, filme de algodão resistente ao fogo, filme de polietileno formaldeído, etc.), filme de carbono ou filme metálico (por exemplo, filme de berílio, etc.). Sob condições de trabalho rotineiras, os requisitos podem ser atendidos com um filme plástico, enquanto a preparação do filme plástico no filme adesivo de algodão à prova de fogo é relativamente fácil, mas a resistência não é tão forte quanto o filme de polietileno formaldeído.
