Pré exame e ajuste da microscopia de fluorescência:
(1) Antes de cada observação de fluorescência, é necessário verificar rotineiramente o alinhamento do filamento, o foco do caminho óptico, a abertura da abertura e as configurações da abertura do campo de visão do dispositivo de fluorescência.
(2) Se os componentes necessários do filtro de excitação/emissão de fluorescência estão instalados no conversor, se a objetiva do microscópio de fluorescência está configurada corretamente e se as manchas de óleo e poeira na frente da lente objetiva foram removidas.
(3) Da mesma forma, ao observar a diferença na luz transmitida, é necessário verificar a conjugação da lente de foco ao centro e do anel de contraste à lente objetiva.
(4) Verifique se há algum líquido ou poeira pendurado no suporte da amostra (lâmina de vidro, lamínula e outros recipientes) e se a espessura está dentro da faixa de distância de trabalho calibrada pela lente objetiva. As amostras fatiadas não devem ser muito espessas, recomenda-se aproximadamente menos ou igual a 10 μm.
(5) Devido à presença de raios ultravioleta na fonte de iluminação, um guarda-sol marrom deve ser colocado acima da plataforma de carga para evitar danos causados pelos raios UV na retina.
(6) A tensão instável pode reduzir a vida útil das lâmpadas de mercúrio de alta tensão, e um regulador de tensão deve ser adicionado à fonte de alimentação da fonte de luz.
(7) Para prolongar a vida útil da lâmpada de mercúrio, ela só pode ser desligada 15 minutos após ser ligada; Uma vez desligada a fonte de alimentação fluorescente da lâmpada de mercúrio, é necessário aguardar pelo menos 10 minutos para resfriar o vapor de mercúrio de volta ao seu estado original quando reiniciada, caso contrário, isso afetará a vida útil da lâmpada.
Observação de imagens de microscópio de fluorescência:
(1) Após ligar a fonte da lâmpada fluorescente por cerca de 5-10 minutos, a intensidade de excitação tende a se estabilizar e a amostra é carregada para observação; Para evitar que a excitação excessiva da luz durante a focagem e a procura de imagens cause a extinção da fluorescência da amostra, a abertura do microscópio de fluorescência é primeiro reduzida ou um filtro ND é adicionado para ajustar a excitação a uma intensidade moderada, e o estágio da amostra é movido regularmente. Depois de determinar a imagem espelhada, ela é ajustada ao estado de fluorescência para gravação.
(2) Ajustes com baixa qualidade de imagem. As medidas de ajuste necessárias que podem ser tomadas, excluindo os fatores de preparação da amostra, são:
① Exclua dispositivos de sombreamento ou limitação no caminho óptico da imagem, como acessórios DIC, filtros ND, etc.
② Reajuste a abertura de foco e abertura do coletor do microscópio de fluorescência.
③ Ajuste cuidadosamente o anel de correção de cobertura da objetiva do microscópio de fluorescência.
