Requisitos de espessura do microscópio óptico para lâminas de vidro
Desidratação Microscópica e Fixação da Amostra: Devido à centrifugação repetida, as células são perdidas, por isso é melhor fixar as células na superfície de uma lâmina de vidro ou folha de plástico para microscopia óptica, para que as células sejam desidratadas e secas juntamente com o vidro slide ou folha de plástico. Requisitos para a espessura das lâminas de vidro em microscopia óptica Para permitir que as células se prendam às lâminas de vidro ou folhas de plástico, é necessário primeiro colocar uma camada de filme nas lâminas de vidro ou folhas de plástico. O método de colocação do filme é o seguinte:
(1) O método mais simples para microscopia óptica é colocar uma fina camada de filme de polivinil formal (formvar). Mergulhe as lâminas limpas em (0.5-1) por cento de solução de clorofórmio formal de polivinil. Depois que a atmosfera se volatiliza, um filme branco aparece nas lâminas. Agite as lâminas várias vezes no clorofórmio para fazer a mudança de filme. Fino e pronto para uso.
(2) Coloque 0,1 latitude poli-L-lisina (dissolva 1 mg de poli-lisina em 1 ml de água filtrada durante a preparação) na lâmina de vidro limpa e coloque-a em uma caixa de abastecimento 450C após a gota se desdobrar . seco. Este método é melhor porque a poli-L-lisina é carregada positivamente, permitindo que mais células carregadas negativamente na superfície se liguem.
(3) Adicionar plasma e glicerol à água destilada na proporção de (30--40) por cento e (3-5) por cento de acordo com os requisitos do microscópio óptico para a espessura da lâmina para formar uma proteína de glicerol solução. O líquido é despejado na lâmina de vidro limpa, desdobrada e seca sob o microscópio óptico. O filme de proteína colocado é imerso em 2% de glutaraldeído para fixar a proteína, lavado e seco para uso posterior. Antes de usar, o plasma é jogado no filme de proteína. Faça-o "ativado", enxágue com tampão após 30 minutos e pode ser aplicado diretamente.
As células fixadas e limpas são transformadas em uma concentração adequada de suspensão de células com água filtrada sob um microscópio digital e o microscópio óptico é colocado em uma lâmina de vidro ou folha de plástico coberta com uma membrana e colocada em um ambiente úmido e baixo temperatura (40C) ambiente (30-120) minutos para permitir que as células se liguem à membrana. Use uma pinça fina para pegar a lâmina de vidro e agite-a em água bidestilada limpa e lave as células soltas com um microscópio óptico. Requisitos para a espessura das lâminas em microscópios ópticos Os microscópios de polarização são rapidamente colocados em um recipiente cheio de 50% de acetona (ou etanol). O processo de desidratação consiste em colocar as lâminas em acetona ou etanol com concentração crescente a cada 3 minutos, e no microscópio óptico ou aumentar continuamente a concentração do agente desidratante no recipiente da lâmina de vidro. De acordo com a experiência de laboratório do autor, a última operação é mais conveniente. O método específico de microscopia óptica pode sugar metade do agente desidratante no recipiente a cada 3 minutos e, em seguida, adicionar uma quantidade igual de agente desidratante com uma concentração de 100 por cento. Após 5-6 operações, a concentração do agente desidratante no recipiente de preço do microscópio atinge acima de 0,5% e as células são desidratadas com sucesso. Após a secagem do ponto crítico, a lâmina de vidro ou folha de plástico é colada ao píer da amostra com adesivo condutivo para revestimento de metal. Também existem conveniências para anexar células a membranas estabelecidas pelo terceiro método. O microscópio óptico pode pendurar as células fixadas por baixa concentração de glutaraldeído no filme de proteína "ativado". O microscópio óptico requer que a espessura da lâmina de vidro seja colocada por 10 minutos, e a lâmina de vidro ou folha de plástico é embebida em 2% de glutaraldeído. Após 30 minutos, enxágue com água bidestilada filtrada e, em seguida, desidrate, seque e aplique o revestimento metálico de acordo com o método acima.
