Métodos de imagem para campos claros e escuros de microscopia de fluorescência
(1) Imagem de campo claro (BFI), que permite apenas que os elétrons transmitidos na região paraxial passem pela abertura da objetiva, formando uma imagem escura sobre um fundo brilhante. Quanto menor for a abertura da lente objetiva, maior será o contraste da imagem do campo claro; (2) Imagem de campo escuro (DFI), que permite apenas que uma parte de um feixe espalhado de grande ângulo ou um feixe de difração de um cristal passe através da abertura da lente objetiva, enquanto bloqueia o feixe transmitido. Isso cria uma imagem gráfica brilhante em um fundo escuro. Este método de imagem de campo escuro pode melhorar o contraste das imagens e é um método de imagem importante.
Existem aproximadamente quatro métodos de microscopia de fluorescência para obter imagens de campo escuro: (1) manter a iluminação vertical ao longo do eixo óptico enquanto move a abertura da objetiva; (2) O uso de iluminação oblíqua para obtenção de feixes dispersos na direção do eixo óptico é denominado Center Dark Field Imaging (CDFI); (3) Uma abertura de lente objetiva com bloqueio de feixe central e uma área transparente circular; (4) Use um holofote circular transparente para detectar a luz e uma abertura objetiva com um orifício circular central. Os métodos * aqui são simples e convenientes, mas utilizam imagens eletrônicas na região mais distante da manga, resultando em grandes aberrações e baixa qualidade de imagem. O segundo método pode evitar as desvantagens acima, mas a abertura objetiva do microscópio de fluorescência Leica recebe apenas uma pequena porção de elétrons difratados dispersos, resultando em menor eficiência. A lateral da abertura é frequentemente bombardeada por um grande número de elétrons, o que pode facilmente causar poluição assimétrica e afetar a qualidade da imagem. A objetiva circular foi melhorada neste aspecto, mas a desvantagem é que é difícil de fazer e é difícil conseguir uma simetria axial completa. Dados os requisitos relativamente relaxados para o sistema de iluminação, a última solução pode ser adotada, que envolve a adição de uma abertura circular no condensador para fornecer iluminação oca para a amostra. O efeito deste dispositivo. Sua resolução de imagem pode ser próxima à de imagens de campo claro, enquanto o contraste é bastante melhorado.
