Como escolher o microscópio de fluorescência certo
O microscópio de fluorescência é um equipamento de imagem microscópica padrão para laboratórios e departamentos de patologia. Ele usa características de fluorescência para observação e geração de imagens. É amplamente utilizado em biologia celular, neurobiologia, botânica, microbiologia, patologia, genética e outros campos. A imagem de fluorescência tem as vantagens de alta sensibilidade e alta especificidade e é muito adequada para a observação da distribuição de proteínas e organelas específicas em tecidos e células, o estudo de colocalização e interação, o rastreamento de processos dinâmicos da vida, como mudanças na concentração de íons , etc
Escolha do Microscópio
Os microscópios de fluorescência são divididos principalmente em três categorias: microscópios de fluorescência verticais (adequados para seccionamento), microscópios de fluorescência invertidos (adequados para células vivas, levando em consideração o seccionamento), microscópios de fluorescência estereoscópicos (adequados para espécimes maiores, como plantas, peixes-zebra (adultos/ embrião), medaka, órgãos de camundongo/rato, etc.).
Seleção de cubos de filtro de fluorescência
Além de considerar os comprimentos de onda de excitação e emissão de sondas fluorescentes, a seleção de blocos de filtro também precisa considerar se há excitação não específica e cor cruzada para amostras marcadas com várias cores. No experimento, tentaremos escolher o comprimento de onda mais próximo do pico de excitação para excitação, e o alcance de recepção deve incluir o pico de emissão. Por exemplo, o pico de excitação do Alexa Fluor 488 é de 500 nm e um filtro de excitação 480/40 pode ser selecionado em um microscópio de fluorescência. Os cubos de filtro de fluorescência comumente usados em microscópios de fluorescência podem ser divididos em dois tipos: passagem longa (LP para abreviar) e passagem de banda (BP para abreviar), que também precisam ser selecionados de acordo com as necessidades.
Escolha da fonte de luz fluorescente
As fontes de luz fluorescente comumente usadas atualmente incluem lâmpadas de mercúrio, lâmpadas de iodetos metálicos e fontes de luz LED que se desenvolveram rapidamente nos últimos anos. O espectro da fonte de luz fluorescente é contínuo e descontínuo, e a energia será diferente em diferentes bandas. Devido à sua banda espectral relativamente estreita, produção de energia mais estável, longa vida útil, segurança e proteção ambiental e muitas outras vantagens, a fonte de luz LED está gradualmente se tornando a principal fonte de luz do microscópio de fluorescência.
microscópio confocal
Na observação do microscópio de fluorescência tradicional, devido à sobreposição de substâncias marcadoras fluorescentes e estruturas de autofluorescência, elas são combinadas intimamente, enquanto a lente objetiva do microscópio de epifluorescência tradicional não apenas coleta luz do plano focal, mas também coleta luz espalhada acima e abaixo do plano focal, resultando em resolução e contraste de imagem bastante reduzidos.
A imagem confocal resolve esse problema detectando apenas a parte da luz refletida no plano focal. A fonte de luz passa por um orifício para formar um pequeno e fino ponto de luz no plano focal. A luz emitida do plano focal é coletada pela lente objetiva. A maior parte da fluorescência emitida do ponto acima ou abaixo do plano focal da lente objetiva não pode convergir para o pequeno orifício. Somente a fluorescência localizada no plano focal e uma pequena parte da fluorescência fora de foco podem passar pelo orifício, enquanto os feixes de luz fora do plano focal convergem na frente ou atrás da placa do orifício e são impedidos de entrar no detector através o pinhole. A imagem detectada é a imagem do plano focal, portanto, a qualidade da imagem final é bastante aprimorada.
Devido às vantagens e praticidade das funções do microscópio confocal de varredura a laser, o microscópio confocal é um assistente experimental indispensável no campo da biologia celular de alta precisão, botânica e pesquisa celular. Ao mesmo tempo, no futuro centro de pesquisa científica, será a ferramenta de pesquisa científica mais básica e central.
