Como a microscopia de fluorescência difere da microscopia confocal a laser
Microscópio de fluorescência
1. Um microscópio de fluorescência usa luz ultravioleta como fonte de luz para iluminar o objeto que está sendo inspecionado para fazê-lo emitir fluorescência e, em seguida, observar a forma e a localização do objeto sob o microscópio. A microscopia de fluorescência é utilizada para estudar a absorção e transporte de substâncias dentro das células, bem como a distribuição e posicionamento de substâncias químicas. Algumas substâncias nas células, como a clorofila, podem apresentar fluorescência após serem irradiadas por raios ultravioleta; algumas substâncias em si não podem apresentar fluorescência, mas se forem coradas com corantes fluorescentes ou anticorpos fluorescentes, podem apresentar fluorescência após irradiação com raios ultravioleta. A microscopia de fluorescência é uma das ferramentas para pesquisas qualitativas e quantitativas sobre tais substâncias.
2. Princípio do microscópio de fluorescência:
(A) Fonte de luz: A fonte de luz irradia luz de vários comprimentos de onda (do ultravioleta ao infravermelho).
(B) Fonte de luz do filtro de excitação: transmite luz de um comprimento de onda específico que pode causar fluorescência na amostra, enquanto bloqueia a luz que é inútil para estimular a fluorescência.
(C) Amostras fluorescentes: Geralmente coradas com pigmentos fluorescentes.
(D) Filtro de bloqueio: Bloqueia a luz de excitação que não é absorvida pela amostra e transmite seletivamente a fluorescência. Alguns comprimentos de onda na fluorescência também são transmitidos seletivamente. Um microscópio que usa luz ultravioleta como fonte de luz para fazer com que o objeto iluminado fique fluorescente. O microscópio eletrônico foi montado pela primeira vez em 1931 em Berlim, Alemanha, por Knorr e Hallowska. Este microscópio usa um feixe de elétrons de alta velocidade em vez de um feixe de luz. Como o comprimento de onda do fluxo de elétrons é muito menor que o da luz, a ampliação do microscópio eletrônico pode chegar a 800,000 vezes, e o limite mínimo de resolução é de 0,2 nanômetros. O microscópio eletrônico de varredura, que começou a ser usado em 1963, permite que as pessoas vejam as minúsculas estruturas na superfície dos objetos.
3. Escopo de aplicação: Usado para ampliar imagens de pequenos objetos. Geralmente usado na observação de biologia, medicina, partículas microscópicas, etc.
microscópio confocal
1. O microscópio confocal adiciona uma semi-lente semi-reflexiva ao caminho óptico da luz refletida, que refrata a luz refletida que passou pela lente para outras direções. Há um defletor com um orifício em seu foco, e o orifício está localizado. No ponto focal, atrás do defletor, está um tubo fotomultiplicador. Pode-se imaginar que a luz refletida antes e depois do foco de luz de detecção passa por esse sistema confocal e não pode ser focada no pequeno orifício, sendo bloqueada pelo defletor. Então o que o fotômetro mede é a intensidade da luz refletida no foco.
2. Princípio: Os microscópios ópticos tradicionais usam fontes de luz de campo, e a imagem de cada ponto da amostra sofrerá interferência de difração ou luz espalhada de pontos adjacentes; microscópios confocal de varredura a laser usam feixes de laser para formar fontes de luz pontuais através de orifícios iluminantes para iluminar o interior da amostra. Cada ponto do plano focal é escaneado, e o ponto iluminado na amostra é fotografado no orifício de detecção, que é recebido ponto por ponto ou linha por linha pelo tubo fotomultiplicador (PMT) ou dispositivo de acoplamento frio (cCCD) atrás da detecção pinhole, e é rapidamente Uma imagem fluorescente se forma na tela do monitor do computador. O orifício de iluminação e o orifício de detecção são conjugados em relação ao plano focal da lente objetiva. Os pontos no plano focal são focados no orifício de iluminação e no orifício de emissão ao mesmo tempo. Pontos fora do plano focal não serão visualizados no pinhole de detecção. Isto é obtido. Imagens confocal são seções transversais ópticas de amostras, superando as deficiências de imagens borradas em microscópios comuns.
3. Campos de aplicação: Envolvendo medicina, pesquisa científica animal e vegetal, bioquímica, bacteriologia, biologia celular, embriologia de tecidos, ciência de alimentos, genética, farmacologia, fisiologia, óptica, patologia, botânica, neurociência, biologia marinha e ciência de materiais, ciência eletrônica , mecânica, geologia do petróleo, mineralogia.
