Como você pode escolher o microscópio confocal certo para você? Existe algum método específico?
A microscopia confocal tem mais vantagens do que a microscopia de campo amplo. A microscopia confocal pode fazer seccionamento óptico contínuo de amostras e excluir interferência de sinal de planos não focais. Por esta razão, a aplicação da microscopia confocal é de fato mais comum. No entanto, há cada vez mais microscópios confocais no mercado. Como escolher?
A microscopia confocal tem mais vantagens do que a microscopia de campo amplo. A microscopia confocal pode fazer seções ópticas contínuas de amostras e excluir interferência de sinal de planos não focais. Por esta razão, a microscopia confocal é de fato mais comum. No entanto, há cada vez mais microscópios confocais no mercado. Como escolher? Ao escolher um microscópio confocal, há duas considerações básicas e importantes: o tipo de amostra que você deseja estudar (por exemplo, células fixas ou vivas) e o tipo de ensaio que deseja realizar (por exemplo, processos celulares estáticos ou dinâmicos).
Imagem confocal de células fixas
Para obter imagens de células ou tecidos fixados e corados, geralmente escolhemos confocal de varredura a laser (LSCM). Isso ocorre principalmente porque as células mortas fixas carecem de eventos biológicos rápidos em células vivas e podem se beneficiar melhor da maior resolução espacial do LSCM. A imagem LSCM é cortar opticamente a amostra por laser, e a velocidade de varredura (dependendo da velocidade do espelho da matriz de varredura) é geralmente de 1 fps. Tempos de exposição mais longos significam um risco maior de fotobranqueamento, mas para células mortas fixas, o tempo não é crítico e podemos calcular a média tirando várias fotos.
Imagens confocais de células vivas
A geração de imagens de células vivas requer proteção adicional contra ambientes hostis. Ao obter imagens, nossa primeira consideração é manter a viabilidade e a saúde das células. Elementos de aquecimento de temperatura constante e sistemas de perfusão são essenciais, especialmente para estudos de lapso de tempo. Os eventos bioquímicos rápidos que controlam o estado fisiológico das células vivas são o que a maioria das pessoas deseja estudar, mas esses eventos são rápidos demais para o LSCM convencional. Além disso, a exposição prolongada ao LSCM também induziu danos à luz tóxica nas células. Portanto, imagens de células vivas requerem microscópios confocais especiais.
Geralmente, existem duas opções para imagens confocais de células vivas: confocais de varredura a laser de varredura rápida e confocais de disco giratório. A microscopia confocal de varredura rápida substitui espelhos galvanômetros mais lentos por espelhos de varredura ressonantes mais rápidos, permitindo velocidades de varredura de até 30 fps; enquanto os confocais de disco giratório (SDCMs) têm a vantagem de uma varredura mais rápida (embora inevitavelmente com perda de resolução espacial), sua velocidade pode teoricamente atingir 2000fps (na prática, muitas vezes é limitada por outros fatores).
Se você está preocupado com fotobranqueamento ou sinal de fluorescência muito fraco, o SDCM pode ser mais adequado. O SDCM usa dois discos rotativos com micropoços dispostos para dispersar a luz de excitação. Ao contrário do LSCM, que varre o ponto da amostra, o SDCM adquire vários pontos de cada vez (cerca de 100 pontos de pixel), de modo que a velocidade é bastante aumentada e a fotobranqueamento do SDCM e menos fototoxicidade. No entanto, você também pode usar confocais de varredura rápida para aumentar a velocidade de varredura, combinados com detectores altamente sensíveis e reduzir a energia da luz de excitação para reduzir a fototoxicidade, que pode manter as ricas funções dos confocais tradicionais.
Sistema de imagem confocal automatizado
Alguns pesquisadores gostam de encontrar maneiras de modificar o microscópio para atender às suas necessidades individuais. E alguns pesquisadores nem estão interessados em saber como os microscópios realmente funcionam. Para os últimos, um microscópio confocal automatizado pode ser mais do seu agrado. Por exemplo, o Olympus FluoViewFV10i é um 4-microscópio confocal a laser de mesa totalmente automático. Sua estrutura integrada compacta quase não requer espaço de instalação. Esse tipo de instrumento é ideal para pesquisadores que precisam fazer muitas aquisições de dados de imagem todos os dias, mas é claro que não refletem totalmente a funcionalidade e a flexibilidade dos confocais tradicionais. Além disso, a NikonA1 também é um sistema confocal totalmente automático. Como a maioria dos microscópios de varredura confocais convencionais, o NikonA1 usa um cabeçote de varredura de galvanômetro, que tem uma resolução mais alta do que o A1R com um cabeçote de varredura híbrido, mas uma velocidade ligeiramente mais lenta (A1R ~30fps)
